zorbax方法开发策略

《zorbax方法开发策略》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、ZORBAX方法开发策略两个或多个色谱峰的分离度取决于三个因素：柱效、选择性和保留时间。ZORBAX色谱柱涵盖了各种类型的键合相，用于优化选择性和保超时间-这是实现最佳分离度的关键所在。这些色谱柱具有各种粒径(从1.8-7pm),可以提供任何分离所需要的柱效。从低pH(pH2・4)开始方法开发既然有如此多种选择，那么您怎样选择一个色谱柱进行方法开发呢？方法开发吋，推荐以低pH的缓冲液流动相为起点・约pH2-3o因为使用低pH的流动相时，碱性化合物在硅胶基质色谱柱上具有最佳峰形。在低pH条件下，硅胶上的硅疑基完全质了化，因此带

2、正电荷的碱性化合物与硅疑基的作用力不大。产生良好的峰形。许多酸性化合物不带电荷，在低pH条件下的保昭时间最长。这些现象是在低pH条件下进行方法开发的主要优势。对于标准分析实验，开始方法开发时应以乙膳作为流动相的冇机改性剂和以25・50mM的磷酸盐缓冲液(pH2-3)作为水相。此条件下pH稳定，这对可离了化化合物进行重现性分析是必要的。首选ZORBAXEclipsePlus柱以获得最佳峰形首选ZORBAXEclipsePlusC18或C8色谱柱，川于低pH条件下的方法开发。EclipsePlus色谱柱是Eclipse家族的最新

3、成员，它采用了改进的硅胶和键合工艺，对碱性化合物的分析具有良好的峰形。EclipsePlus色谱柱可以在pH2-9范围内使用，讣方法开发更具灵活性。他们可以在低至pH2的条件下仍然稳定性，因此是初始方法开发的理想之选。在低pH条件下优化溶剂和键合相初始方法开发步骤，可能很快就获得满意的分离。但是，如果需要进一步优化，可以将乙腊替换为甲醇或四氢咲喃，然后分离就再次获得了优化。此步可能会获得满意的方案，但是，如果仍然需要进一步优化，那么可以改变色谱柱键合相。在低pH条件下，可以选择多种键合和进行优化。这些键合和包括Eclipse

4、Plus键合相，也包括的EclipseXDB家族键合相(带68、C8、苯基和CN)。备用选择包括六种不同的StableBond键合相:SB-C18>SB・C8、SB-PhenykSB・CN、SB・C3和SB・Aq。在低pH条件下可能需要改善酸性化合物的保留。对于此情况，则将pH降的更低，低至pH1-2,并H使用StableBond色谱柱。这些色谱柱可以在非常低的pH条件下具冇极高的稳定性和可以为实现最高分离度的分离提供多种选择性。在中等pH(4-9)条件下进行方法开发ZORBAXEclipsePlus柱有些样品可能在低pH条

5、件下不溶解，或者在屮等pH条件卜•具有更好的溶解性和稳定性。尽管仍然采用EclipsePlusC18色谱柱，但可以采用中等pH范用进行方法开发。EclipsePlus色谱柱可以在高达pH9的条件下稳定，因此它在中等pH条件下是相当可靠的。这些双封尾的色谱柱有两个主要优势・既可以在低和中等pH条件下稳定，也具冇足够的键合密度以阻止pH6-9条件下硅胶溶解。在中等pH条件下，碱性化合物(例如胺类)可能仍带有正电荷，阳硅胶表面的硅疑基可能带有负电荷。因此尽可能多地掩蔽硅疑基才能在中等pH条件下获得最佳峰形。这使得EclipsePl

6、usC18色谱柱成为中等pH条件下最佳的启始色谱柱。磷酸盐缓冲液一般是pH7吋的首先流动相，因为它的缓冲范围是pH6.1-在小等pH条件下，乙酸盐缓冲液为第二选择，因为它的缓冲范围为pH3.8-5.8o而且乙酸盐貝有良好挥发性，可以被LC/MS兼容，使他成为良好的选择。备用选择——ZORBAXEclipseXDB■苯基、CN利IBonus・RP在中等pH条件下进行方法开发的过程与在低pH条件下方法开发的过程相似，先优化冇机改性剂，如果没有达到所需的分离度，再选择备用键合相。在屮等pH条件下的备用键合相为：ZORBAXEcli

7、pseXDB-苯基、CN和Bonus-RPo他们对对许多样品的提供非常不一样的选择性。重新进行一遍Z前的方法开发过程。Bonus-RP色谱柱具冇极性包埋的酰胺基团，对许多样品具冇不同的选择性、对碱性化合物具有良好的峰形和能在100%水和流动和屮使用。在高pH(9-12)条件下进行方法开发选择ZORBAXExtend・C18色谱柱在低或中等pH条件下，某些碱性化合物的分离可能仍然保留不足或选择性不好。对于这些样品，可能适合采用高pH条件进行分离。在此之前，硅胶在高pH条件的分离被禁止使用，因为潜在的硅胶溶解，导致色谱柱寿命短。

8、最新的色谱柱技术(如ZORBAXExtend・C18)对以防止硅胶溶解，因此，可以达到正常的色谱柱寿命和可以开发高pH条件下选择性的优势。在高pH条件下，Extend-C18色谱柱可以选择的流动相缓冲液为冇机盐缓冲液，如三乙胺和红氧化馁。这些缓冲液最适合与甲醇为有机改性剂的流动相一起使用，