极性化合方法开发系统策略

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1、极性化合物解决方案及Hilic方法开发策略WatersChemistryoperation丁娟娟©2011WatersCorporation1Outline
[Polarcompoundretentionstrategy]—RPretentionchallenge—HILICretentionintroduction
[HILICmethoddevelopmentstrategy]—Methoddevelopmentscreeningapproach—Implementingtheapproach:p

2、racticalexample—Optimizationsteps©2011WatersCorporation2Outline
[Polarcompoundretentionstrategy]—RPretentionchallenge—HILICretentionintroduction
[HILICmethoddevelopmentstrategy]—Methoddevelopmentscreeningapproach—Implementingtheapproach:practicalexample

3、—Optimizationsteps©2011WatersCorporation3目前保留极性化合物方法比较技术优点缺点
洗脱需要高浓度盐缓冲液或采用pH离子交换
能保留任何离子型化合物进行梯度洗脱–不可用于MS分析
对于不可离子化的极性化合物无效
能保留任何离子型化合物
色谱柱平衡时间很长
在一根色谱柱上同时发生离子
很难采用梯度分离离子对色谱对色谱和反相色谱复合机理
不适用于MS
开发方法很困难
流动相中的有机溶剂比例高，
样品和流动相溶解度的问题LC/MS分析具有更高的灵敏度
机理还没有完全搞清

4、楚HILIC
SPE洗脱液可以直接上样到
应用范围还比较窄色谱柱，，无需蒸发步骤，无需蒸发步骤
熟悉的技术和原理
非极性的固定相对极性化合物的保
高分离效果留弱反相色谱
平衡快速
在水相流动相条件下发生““疏水塌“疏水塌
广泛的色谱柱选择范围陷陷”陷”©2011WatersCorporation4反相色谱分析极性化合物的挑战：
为了使极性化合物在非极性表面保留，我们一般会尽量减少流动相中有机相的比例,如降低流动相的洗脱能力(e.g.,使用100%水相流动相)
问题:颗粒表面微孔去湿的风险(疏水塌陷)–

5、色谱表面的内孔干涸.什么是“疏水塌陷”/”微孔去湿”？为什么会发生呢？©2011WatersCorporation5反相色谱填料的内孔表面色谱填料是多孔颗粒（（“（““海绵“海绵”），99％％发生色谱分离的表面是％发生色谱分离的表面是在内孔表面流动相必须允许流动相进入内孔以保证待分析和分离的化合物能够和色谱填料有保留Analyte如果内孔““干涸“干涸””，”，，则样品不能够，则样品不能够进入色谱填料的内孔表面，，则该化，则该化合物将不能在色谱柱上保留。反相色谱填料内孔表面“干涸”将大大影响到色谱分离

6、©2011WatersCorporation6疏水塌陷::会产生什么现象呢??
当我们压力一旦停止，再启动时，我们观察到死时间（V）和保留时间的漂移，表明颗粒表面内孔排出了水相0流动相*1—10%死时间的漂移—23%分析物保留时间的丢失ACQUITYUPLC®BEHC18V漂移L=5cmoF=0.3mL/minP=2,040T=90oC%Dewet=23.100.200.400.600.801.001.201.25Minutes*1T.H.Walter,P.IranetaandM.Capparella

7、J.Chromatogr.A1075(2005)177-183©2011WatersCorporation7疏水塌陷::和固定相的设计相关123Atlantis®T34结合适当的设计因素4.6x100mm,3µm5疏水塌陷可以最大程度上减少12345<7%胸腺嘧啶塌陷0.000.501.001.502.002.503.003.504.004.505.005.506.006.507.007.508.008.509.00Minutes3,4Zorbax®EclipsePlusC18Compounds:4.

8、6x100mm,3.5µm121.Thiourea2.5-Fluorocytosine53.Adenine4.Guanosine-5’-monophosphate5.Thymine2,3,4IsocraticConditions100%保留时间丢失，MobilePhase:10mMNH4COOH,pH3.05FlowRate:1.2mL/min1使用传统的C18InjectionVol:7µLTemperature:Ambient胸腺嘧啶塌陷:~100%