复杂性疾病的分子诊断

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1、复杂性疾病的分子诊断几乎所有慢性粒细胞口血病(CML)患者都有染色体异常，属于染色体移位：U9;22){q34;qll)，其发病的分子机制是产生BCR/ABL融合基因。临床上以细胞学作为常规诊断方法，另外还可以用荧光原位杂交技术(Fish)和逆转录・PCR技术(RT-PCR)检测BCR/ABL融合基因。请你简述用Fish和RT-PCR两种方法诊断慢性粒细胞白血病(CML)时各自的优缺点。慢性粒细胞白血病:是一种获得性造血干细胞恶性克隆性增生疾病。病程进展慢，临床以脾肿大、粒细胞显著增多、外周血及

2、骨髓中出现大量中幼、晚幼粒细胞为特征。患者有慢性期、加速期、最终急性变期。Fish和RT-PCR两种方法诊断慢性粒细胞白血病(CML)时各自的优缺点1、FISH是通过根据已知的基因序列合成探针，并分别标上不同的荧光。这个探针就可以根据基因的序列去寻找它在染色体上的位置，并与之结合。由于每条探针上标记很多个荧光分子，在荧光显微镜下就可以看到明亮的信号。如果两个基因分别标上红色和绿色荧光，如果两个基因跑到一起去了(形成了融合基因)，红色和绿色荧光跑到一起，就变成了黄色的荧光(即融合信号)。A、要做常

3、规的FISH检测，需要先确定检测的目的，选择不同基因的探针，并且只能对特定的基因进行分析。B、一般的FISH检测需要指定基因特异性的探针，相对于染色体核型分析来说，可以更精确和更精细地对基因进行定位分析，但失去了核型分析的宏观性。C、FISH对基因或融合基因的扩增也能较好地检测。D、FISH检测一般最多和分析1000个细胞的荧光信号，检测灵敏度较核型分析高。E、敏感性更高，但是设备要求高，费用高，而且发现不了可能存在的其它异常核型。2、PCR:BCR-ABL1融合基因虽然从核型分析上都是Ph染色

4、体,看起来一样。但BCR-ABL1基因序列也有多种，而且从基因序列水平來看有很大差异。但BCR-ABL1融合基因的序列相对固定并有其规律，我们已经熟知了常见型BCR-ABL1融合基因的序列，因此可以根据基因序列设计相应的方案进行检测。A、它的优势有：可以对多至百万个细胞进行检测，甚至发现一百万个细胞里的一个肿瘤细胞。是目前检测灵敏度最高的方法，适合进行微量肿瘤细胞残留的检测。B、不需要细胞培养或杂交过程，报告速度快。C、但特定的基因检测方案，只能对特定的基因异常进行检测。如果只对初治或复发的CM

5、L患者进行BCR-ABL1的检测，只能知道BCR-ABL1融合基因的信息，而不能知到是否有其它附加的染色体异常，而后者是有一定预后意义的。D、尤其对于初治或复发的CML患者，PCR检测并不能代替核型分析。E、由于PCR方法只能检测很小范围内的基因序列，如果基因序列发生变异，可能会导致PCR检测的失败，从而导致假阴性，因此对实验室的质量控制要求很高，而设备要求不太高，为了提高检测结果的正确性，最好是在检测技术稳定、可靠的实验室进行。