感染性疾病的分子诊断

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1、感染性疾病的分子诊断一、感染性疾病的诊断和治疗监测二、耐药监测与分子流行病学调查三、医院获得性感染的监测与控制一、感染性疾病的诊断和治疗监测分子生物学检验技术在感染性疾病中的应用主要包括对病原生物进行鉴定、分型、耐药诊断和治疗过程中的疗效监测等检测核酸分子或蛋白质分子目前已经应用于一些重要的感染性疾病，如结核病、病毒性肝炎、艾滋病、SARS、人禽流感等一、感染性疾病的诊断和治疗监测（一）结核分枝杆菌（二）乙型肝炎病毒（三）人类免疫缺陷病毒（四）SARS冠状病毒（五）人禽流感病毒结核分枝杆菌(M.tuberculosis)，俗称结核杆菌，是引起结核病的病原菌。可侵犯全身各

2、器官，但以肺结核为最多见。结核病至今仍为重要的传染病。估计世界人口中1/3感染结核分枝杆菌。据WHO报道，每年约有800万新病例发生，至少有300万人死于该病。我国建国前死亡率达200-300人/10万，居各种疾病死亡原因之首，建国后人民生活水平提高，卫生状态改善，特别是开展了群防群治，儿童普遍接种卡介苗，结核病的发病率和死亡率大为降低。但应注意，世界上有些地区因艾滋病、吸毒、免疫抑制剂的应用、酗酒和贫困等原因，发病率又有上升趋势。（一）结核分枝杆菌一、感染性疾病的诊断和治疗监测（一）结核分枝杆菌1.生物学特性与致病性2.基因组特点3.结核分枝杆菌核酸的检测（一）结核分

3、枝杆菌1.生物学特性与致病性结核分枝杆菌复合群包括人结核分枝杆菌、牛分枝杆菌、非洲分枝杆菌和田鼠分枝杆菌，其中前三者对人类致病人型结核分枝杆菌感染的发病率最高一、感染性疾病的诊断和治疗监测一、感染性疾病的诊断和治疗监测结核分枝杆菌生长缓慢，增殖一代需15～20小时，生长成可见菌落一般需4～6周在组织细胞内大量繁殖引起炎症，菌体成分和代谢物质的毒性以及菌体成分诱发的机体免疫损伤一、感染性疾病的诊断和治疗监测2.基因组特点共价封闭环状结构标准株结核分枝杆菌基因组全长4.4kb,包含4000个蛋白质编码基因和50个RNA编码基因一、感染性疾病的诊断和治疗监测(1)重复序列：如

4、IS6110，仅存于结核分枝杆菌复合群细菌染色体上长1355bp的重复插入序列，具有复合群特异性(2)蛋白质编码基因(3)rRNA基因：每个细胞约含有103～104个rRNA，含有结核分枝杆菌高度保守的序列，也有分枝杆菌种特异性序列一、感染性疾病的诊断和治疗监测3.结核分枝杆菌核酸的检测实验室检查手段主要包括标本直接涂片染色镜检、分离培养鉴定以及血清学抗原检测方法分子生物学理论和技术已经用于分枝杆菌的分子结构和功能的研究中，并开始用于临床菌种和耐药株的鉴定及监测一、感染性疾病的诊断和治疗监测PCR菌种鉴定法PCR直接测序鉴定法PCR-DNA探针鉴定法PCR-基因芯片法(

5、1)结核分枝杆菌菌种鉴定：一、感染性疾病的诊断和治疗监测(2)药物敏感性试验与耐药基因检测：缩短培养和鉴定的时间，及时指导临床选药药物敏感性试验直接检测耐药基因一、感染性疾病的诊断和治疗监测（二）乙型肝炎病毒1.生物学特性及致病性2.乙型肝炎病毒核酸的检测3.变异株与耐药突变检测乙型肝炎病毒简称乙肝病毒。是一种DNA病毒，属于嗜肝DNA病毒科（hepadnavividae）。根据目前所知，HBV就只对人和猩猩有易感性，引发乙型病毒性肝炎疾病。完整的乙肝病毒成颗粒状，也会被称为丹娜颗粒（Dane）。1965年由丹娜发现。直径为42纳米。颗粒分为外壳和核心两部分。（二）乙型

6、肝炎病毒1.生物学特性及致病性HBV对外界环境的抵抗力较强，且传染性较强输血或注射是重要的传播途径HBV感染后潜伏期约2～6个月，HBVDNA在肝细胞内以游离DNA和整合到宿主细胞染色体的方式存在HBV分为8个基因型，A～H型一、感染性疾病的诊断和治疗监测2.乙型肝炎病毒核酸的检测（1）荧光定量PCR技术：测定HBV病毒载量HBVDNA107拷贝/毫升，提示病毒复制活跃HBVDNA<103拷贝/毫升、HBeAg转为阴性，正常的病人预后相对较好一、感染性疾病的诊断和治疗监测（2）支链DNA（bDNA）技术：一种核酸探针杂交标志信号放大技术。优点：稳定性和重复性较好，结果

7、准确，操作简单，将待测病毒裂解释放核酸后变性为单链，即可进行检测。缺点：敏感性较低、检测范围窄而不适用于低水平病毒的检测。一、感染性疾病的诊断和治疗监测还可以用于乙肝病毒基因检查的方法主要有：荧光PCR法、竞争PCR法、PCR酶联免疫吸附法、荧光标记物法和PCR酶联化学发光等方法。3.变异株与耐药突变检测HBV可能发生自然变异HBV在人体活疫苗接种和抗病毒治疗等压力下发生变异HBV基因组的变异常引起病毒生物学特性的改变，从而导致HBV感染发病机制的变化、血清学检测指标的改变以及免疫逃逸，给乙型肝炎的诊断和治疗带来困难一、感染性疾病的诊断和