DGGE技术检测中华绒螯蟹线粒体Cytb基因遗传多样性的实验条件探讨

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1、万方数据第15卷第2期2008年6月天津农学院学报JournalofTianjinAgriculturalUniversity、，r01．15。No．2June，2008文章编号：1008-5394(2008)01-0027-05DGGE技术检测中华绒螯蟹线粒体Cytb基因遗传多样性的实验条件探讨串靳婷婷1～，王秀利2，王晓梅1(1．天津农学院水产科学系天津市水产生态及养殖重点实验室，天津300384：2．大连水产学院，辽宁大连116023)摘要：目前，变性梯度凝胶电泳技术(DGGE)多用于微生物和临床医学检测，而用于水产动物基因片段检测的报道甚少。相关研究显示

2、，针对不同的目的基因，其PCR条件、变性剂浓度梯度和电泳时间是DoGE检测实验成败的关键。因此，为应用DGGE技术分析中华绒螯蟹线粒体Cyth基因片段的遗传多样性，探讨了DGGE技术的关键因子，确定了PCR反应体系和循环参数、电泳时PCR产物的上样量、变性剂浓度范围和电泳的最适时间。关键词：P(果；DGGE：电泳中图分类号：S932．52文献标识码：AStudyonParametersofPCRandElectrophoresisinDGGETechniqueonAnalyzingDiversityofMitochondrialCytochromebGeneof

3、EriocheirsinensisJINTING．tingL29WANGXIU-If，WANGXiao．meil(1．rianjinKeyLaboratoryofAqua-Ecology&Aquacnimm，DepartmentofFisheriesScience，ri锄jinAgriculturalUniversity，Tianjin300384，China；2．DalianFisheryUniversity，Dalian116023，LiaoningProvince，China)Abstract：ThetechnologyofDenaturingGradie

4、ntGelElectrophoresis(DGGE)wasusedformicroorganismandclinicalmedicinedetectionatpresent，thereportsfordetectingthegenefragmentsbyDGGEtechniqueinaquaticanimalswel"eextremelyfew．SomeresearchesindicatethatthePCRreactionparameters，therangeofdenaturantconcentrationofthegelandthetimesofelect

5、rophoresisarekeyfactorsinDGGEtechniqueforanalyzingdifferenttargetgenefragments．Inordertodetectthediversityofmitochondrialcytochromebgeneofthe．EriocheirsinensisusingDGGEtechnique，SOmekeyfactors，namelythesuitableparametersofPCRreaction，thenumberofcycles，theloadingquantitiesofPCRproduct

6、ion，therangeofdenaturantconcenlrationinpolyacrylamidegelandtheoptimumelectrophoresistimewe∞confmned．Keywords：PCR：DGGE：electrophoresis变性梯度凝胶电泳(DenaturingGradientGelElectrophoresis，DGGE)是EhFisher和Lerman发明的用于检测DNA突变的技术‘¨，可有效地检测50～500bp左右的DNA片段内小至单一碱基的突变。为提高DGGE的检出率，常在PCR一条引物的5’端]JH_L30～

7、50bp的GC-夹(GC．Clamp)，这样不仅可以阻止DNA完全解链，还能够改变DNA的解链特性，从而使DGGE的检出率接近100％t21。‘收稿日期：2008～Ol一25基金项目：天津市科技发展基金和国际合作基金“绒螯蟹属DNA数据库的构建及河蟹优良品种鉴定的研究”(033803511及033803511G)，天津市高等学校科技发展基金“中华绒螯蟹现有种质资源群体遗传结构的研究”(2004BA31)作者简介：靳婷婷(1983--)，女，天津市人，硕士在读，主要从事水产养殖动物遗传育种的研究。E-mail：iintingtin91983．dlsc@yahoo．

8、com．cn。通讯作者：