样本采集与处理

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1、样本采集样本采集要注意的重点是，所采集的临床标本一定要正确和采集的时间合适，并注意采用正确的标本容器，采集的方法程序对有些临床标本非常重要。在疾病发展过程中，标本采集过早或过晚都可能会给出假阴性结果。尽可能在最短的时间内完成样本的采集（应该保证30min内完成，不适当的处理时间将直接影响和干扰研究的结果），应尽快降低所采集组织样本的温度。肿瘤组织标本的采集和处理应遵循严格的生物安全处理规范，也可根据研究者所提出的特殊要求，按照对方提供的操作模式进行相关处理。（1）患者入院后进行生物安全性检查。检测HIV以及嗜肝病毒HBV及HCV感染情况。HIV感染患者不列为采集对象。HBV及HCV感染者，须

2、在样本上明确注明。（3）组织标本取材时间肿瘤外科手术后，标本离体30min内。（4）标本采集每种肿瘤主要采集3类生物样本，并要保证这些样本的质量和数量能够用于DNA、RNA和蛋白质提取及满足相关的实验分析。1)新鲜组织(包括手术和活检组织)实体组织样本采集包括外科手术切除的或活检和尸检得到的正常、良性和恶性肿瘤组织。手术结束后，在临床肿瘤病理专家的指导下，在不影响病理诊断取材需要的前提下，采集组织样本。A。标本取材部位：肿瘤组织、癌旁组织（癌组织旁1cm）和正常组织（癌组织旁5cm以外或最远处）。a）临床诊断明确，未经放疗和化疗的手术切除标本，在病理医生指导下取材。b）尽量保证癌组织没有坏死

3、（有坏死的标本很难提取高质量的RNA和蛋白）。c）配对“癌旁组织”，选择距离癌灶边缘3cm范围内的组织样本，配对“正常组织”，要选择距癌灶边缘5CM以上或距离癌灶边缘最远段（或手术切缘处）取组织样本，应注明距离。对于空腔器官，如食管、胃、肠、胆囊、膀胱等，“癌旁组织”“正常组织”应取相应部位的“粘膜组织”样本。d）在保障病理学检测所需标本的前提下，尽量提供足量的肿瘤和癌旁正常组织，一般不少于200mg或10E7细胞。e）手术切除的组织样本必须迅速置于液氮中，然后保存于液氮罐或-80℃冰箱，这一过程尽量在手术标本离体后30分钟内完成。f)其中一块组织可用OCT处理后冻存，可用于形态学观察和显微

4、切割。(OCT(OptimalCuttingTemperature)包埋剂是一种常用的固形剂。用其包埋组织进行速冻后，能与组织固定成形，有利于保存组织结构完整性，便于其形态结构的分析)B。过程：使用数码相机拍摄标本外观后，将标本切成小块（直径0.5cm×0.5cm，厚度<0.5cm），为减少处理时间，标本不应切得太小，然后放入冻存管中，标记后放入标本盒中，盒盖上附有记录标本编号、采集时间及标本类型的标签。每例病人样本保存3-5份冻存管标本。每份组织重量原则上不低于2g。2)石蜡包埋组织a）中性福尔马林固定手术切除标本按病理学操作规范进行取材b）取材部位包括癌灶，以及癌灶周围3cm以内的癌旁组

5、织，3~5cm的近癌组织和5cm以外的远癌组织或距癌灶边缘最远段分别取2-3块。取材尽量以癌灶为中心水平向两侧取材，尽量保证足够大的组织样本。取材应该以“远癌-近癌-癌灶”的顺序。癌灶处取材包括癌与正常组织的交界及肿瘤浸润最深处。所有取材的组织块应标明取材部位。c）采集完整的临床病理和随访资料，其中治疗过程和生存期的资料最为关键。3）血液（包括血浆、血清）始终遵循标准防护方法，所有操作均要戴手套。在抽取静脉血时，应当使用一次性的安全真空采血管取代传统的针头和注射器，因为这样可以使血液直接采集到带塞的运输管和（或）培养管中。用完后自动废弃针头。每例不低于全血10mL，分装两份。以全血作为待测标

6、本时，必须注意抗凝剂的选择，一般使用EDTA-K3或枸橼酸钠，不可使用肝素。全血样本如用于DNA提取检测，可4℃下短期保存，如用于RNA检测，则应在取血后尽快提取RNA。a）及时采集入组病例的外周血标本,初诊患者3-5ml，EDTA抗凝，3000rpm离心，血浆和有形成份(白细胞成分)分别用统一质量标准的容器保存（尽量在2h内完成血浆的分离工作）。b）特殊病例要保存治疗前后的外周血标本各5ml(血浆或血清)。c）采集的血浆或血清样本在无菌条件下分装，0.5-1mL/每管,用螺纹口管，-80℃保存。d）手术前后血浆或血清，明确临床诊断后在术前取血，术后第14天或出院前取血。e)化疗前后血浆或血

7、清采集按照临床试验操作规程和技术标准制定。f)非癌患者/正常对照血浆或血清样本，选择年龄、性别与实验组相匹配的非癌患者为对象。2、根据研究课题的具体目标，所采集的生物样本主要用于3类实验研究：1）测试样本：主要用于基因、蛋白表达谱建立，基因组测序分析，样本质量优先。主要考虑的因素为肿瘤分型和分类，每一类型要达到统计学小样本数目。2）验证样本：主要用于标志基因变异的确认，进行RT-PCR、WB、IHC/ISH、