高效液相色谱法测定酱油中的防腐剂

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1、高效液相色谱法测定酱油中的防腐剂实验目的掌握高效液相色谱仪的原理和使用方法，酱油类样品前处理方法。实验原理色谱法是多组分混合物的分离、分析方法。当流动相携带着混合物流过固定相时，由于各组分在流动相和固定相之间的分配系数的差异使得性质不同的各个组分在流动移动的速度产生差异，经历两相间的反复多次分配后，混合物屮的各组分被一一分离，按一定的次序从色谱柱后流出。分离后的组分市流动相携带进入检测器后，组分的物质信号被转换为电信号，并由记录仪记录为信号随时间变化的曲线一一色谱图。在确定的实验条件下，组分色谱峰的保留值有一定

2、的特征性，可以作为色谱定性分析的依据，而各组分在检测器上的响应信号（峰面积或峰高）与其质量（或浓度）成正比，可以作为色谱的依据。仪器原理及使用方法一、高效液相色谱仪高效液相色谱仪一般可分为4个主耍部分：高压输液系统（贮液器、高压泵、脱气器）、进样系统、分离系统和检测系统。此外还配有辅助装置：如梯度淋洗、自动进样及数据处理等。结构示意图如下图1所示，其工作过程如下：首先高压泵将贮液器中流动相溶剂经过进样器送入色谱柱，然后从控制器的出口流出。当注入欲分离的样品时，流经进样器的流动相将样品同时带入色谱柱进行分离，然后

3、依先后顺序进入检测器，记录仪将检测器送出的信号记录下来，由此得到液相色谱图。进样器试样梯度洗脱装置色谱柱记录仪图1高效液相色谱仪结构图高效液相色谱仪中的检测器是三大关键部件（高压输液泵、色谱柱、检测器）之一，主要用于检测经色谱柱分离后的组分的变化，并由记录仪绘出谱图来进行定性、定暈分析。理想的检测其具有灵敏度高、响应快、重现性好、线性范围宽、适用范围广、死体积小、对流动相流量和温度波动不敏感等特性。常见的检测器有：紫外检测器（UV）,二极管阵列检测器（DAD）,荧光检测器（FLD）,示差折光检测器（RID）,电

4、导检测器（ECD）等。二、液相色谱仪的使用方法：（1）将配好并脱气后的流动相装入储液瓶中，置于合适位置。（2）接通电源，按要求设置好相应的实验参数（如流动相流量、检测波长等），打开色谱工作站，欲热机器，至基线平直。（3）用注射器和进样阀配合进样分析，待前一个试样中各组分都出峰后再进第二个试样。（4）根据标样和未知样屮相应组分的保留时间进行定性分析，根据各峰的峰而积或峰高按选定的定量方法进行定量分析。（5）完成实验后，按开机的逆顺序关机。三、用微量注射器进样的操作要点：用注射器取液体样品前应先用少量的试样洗涤儿次

5、，弃去废液，再将针头插入试样反复抽排儿次，然后慢慢抽入试样，并稍多于需要量。如有气泡，则将针头朝上，使气泡上升排出，再将过量的试样排出，用无棉的纤维纸吸去针头外所沾试样。注意：切勿使针头内的试样流失。取好样后应立即进样。进样时，注射器应与色谱仪进样口垂直，应一只手扶着针头，以防弯曲折断。如图2使针尖刺穿硅橡胶垫圈再插到底，紧接着迅速注入试样，完成后马上拔出注射器，整套动作应进行得稳当、连贯、迅速。针尖在注样器屮位置，插入速度，停留时间和拔出速度都会影响进样的重复性，操作中应了以重视。由于高效液相色谱的柱压很高，

6、不能用注射器将试样直接注入色谱柱头，而要通过进样阀（如图3）进样。取样，然后在进样阀手柄处于取样位置将针管插入进样口，待前一试样分离完后将注射器内样品推入进样阀，并将手柄扳到进样位置，拔出注射器。由于手动进样阀有定量管，故一般可用注射器取2—3倍于定量管体积的试样，注入时由定量管控制进样量，这样可保证进样的精度。图2微量注射器的进样操作实验部分1.主要试剂氢氧化钠，苯甲酸，亚铁氧化钾，乙酸锌，乙酸镀，甲醇（色谱纯）水（超纯水，0.03vs/cm）2.仪器美国Syltech公司P500高效液相色谱仪系统（VUV・

7、2X/30紫外可见检测器，P500输液泵），KQ-50B型超声波清洗器，lmL注射器，0.45pm滤膜，微孔过滤器，20mL注射器。液相色谱条件色谱柱：ThermoElectron公司25005-154630—C18150mmx4.6mm色谱柱；流动相：乙进样量20让；流速：l.OmL/min；紫外检测器波长：228nm；柱温：室温；保留时间定性，面积归一法定量。1.溶液的配制3.1试剂的配制（1）1.0moL/LM氧化钠溶液：称取96.0%氢氧化钠4.17g溶于100mL容量瓶中，以水定容。（2）10%亚铁氟

8、化钾溶液：称取99.5%亚铁孰化钾11.17g置于200mL磨口锥形瓶中，加水lOOmL溶解。（3）20%乙酸锌溶液：称取99%乙酸锌25.25g置于200mL磨口锥形瓶中，加水lOOmL溶解。（4）流动相中乙酸镀溶液：称取99.0%乙酸镀1.57g,加水溶解，定容与lOOOmL容量瓶中。（5）流动相的配制：乙酸镀溶液■甲醇=95：5（体积比），经过0.45pm滤膜过滤，使用前经超声波