PEG诱导鸡红细胞融合影响因素探讨

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1、第27卷第2期德州学院学报Vol.27,No.22011年4月JournalofDezhouUniversityApr.,2011PEG诱导鸡红细胞融合影响因素探讨11,21,31马云,何昆,王晓玉,李芬(1.信阳师范学院生命科学学院,河南信阳464000;2.浙江师范大学化学与生命科学学院,浙江金华321004;3.西华师范大学生命科学学院,四川南充637002)摘要:细胞融合技术是近年来迅速发展起来的一项新兴细胞工程技术,本研究以鸡红细胞为材料,以PEG(Mw=4000)为诱导剂,研究不同的PEG体积分数(0%、25%、50%、75%、100%),不同的融合时间(5

2、min、10min、15min、20min、25min),不同的融合温度(20℃、30℃、35℃、38℃、40℃)对鸡红细胞融合率的影响.结果显示:PEG的体积分数为50%,融合时间为15min,温度为38℃时融合的效果最好.关键词:细胞融合;鸡红细胞;聚乙二醇(PEG);时间;温度中图分类号:Q272;Q781文献标识码:A文章编号:1004-9444(2011)02-0054-050引言1材料与方法细胞融合技术是研究细胞遗传、基因定位、细胞1.1材料免疫、病毒、肿瘤和培育生物新品种的重要手段,有1)试验材料:新鲜鸡血采自信阳师范学院谭山着重大的实践意义,正得到科学界

3、的日益重视.在普包菜市场.通高中生物课程标准实验教科书的现代生物科技专2)试验仪器:MoticBA200数码互动显微镜题中,已经将细胞融合技术写入了课本.聚乙二醇(麦克奥迪实业集团有限公司),TDL-5离心机(上(PEG)法诱导细胞融合以其容易制备、活性稳定、不海安亭科学仪器厂),恒温水浴箱,电磁炉等.需要特别的仪器设备、操作方便等优点,被普遍用于3)试验试剂及配制:不同体积分数的PEG液,[1,2]生物、遗传、医药等研究领域.但同时该方法也Alsver液,GKN液,0.85%生理盐水等试剂的配制受许多因素的影响,如PEG的相对分子质量、PEG按照参考文献[3,4]进行

4、.的体积分数、融合温度、融合时间、pH等.为了得到1.2试验方法更好的融合效果,本试验以鸡红细胞为材料,探讨了1)鸡红细胞悬液的制备:按常规方法制备鸡红[5]不同体积分数的PEG,不同的处理温度及不同的融细胞储备液,具体操作过程参照李玲等的方法.合时间对鸡红细胞融合率的影响,并对试验数据进2)PEG浓度对红细胞融合效果的影响:取5行生物统计,以期得到PEG诱导鸡红细胞融合的最mL上述鸡红细胞悬液于5个离心管中,分别加入适条件,并为细胞生物学相关实验及动物细胞融合0.5mL浓度为0%、25%、50%、75%、100%的PEG研究参考依据.液,在38℃条件下融合15min.

5、然后用詹姆斯绿染收稿日期:2010-08-30基金项目:河南省高等学校青年骨干教师资助计划及信阳师范学院青年骨干教师资助计划(2006BAD04A16)作者简介:马云(1974-),男,宁夏平罗人,副教授,博士,主要从事动物生物技术方面的研究.第2期马云,等:PEG诱导鸡红细胞融合影响因素探讨55色观察并计算融合率.5)细胞融合率的计算:细胞的融合率由公式:3)处理时间对鸡红细胞融合效果的影响:取五融合率=融合细胞数/总细胞数(100%)计算,然后个离心管,每个离心管中加入1mL1.2中1)中所对试验数据用卡方检验比较处理间细胞融合率的差述细胞悬液,再加入0.5mL50

6、%的PEG液,然后异.在38℃水浴中分别融合5min、10min、15min、20min、25min,再进行染色观察并计算融合率.2结果与分析4)温度对鸡红细胞融合效果的影响:取五个离心管,每个离心管中加入1mL1.2中1)中所述细2.1PEG浓度对鸡红细胞融合效果的影响结果胞悬液,再加入0.5mL50%的PEG液,分别在设置了0%、25%、50%、75%、100%的PEG诱20℃、30℃、35℃、38℃、40℃水浴中融合15min,最导剂以探讨PEG浓度对鸡红细胞融合效果的影响,后进行染色观察并计算融合率.结果见图1和表1.a):0%PEG处理的细胞融合;b):25%

7、PEG处理的细胞融合;c):50%PEG处理的细胞融合;d):75%PEG处理的细胞融合;d):100%PEG处理的细胞融合图1PEG浓度对鸡红细胞融合效果的影响结果(400×)表1不同体积分数的PEG对鸡红细胞融合率的影响编号PEG体积分数(%)观察细胞数(个)融合细胞数(个)融合率(%)10169002251864623.25a±2.743501153731.53b±1.094751683521.58c±1.815100细胞破碎无法计数--注:差异显著性一栏的小写字母不同者表示细胞融合率在0.05水平上存在差异(下同).由表1可以看出