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1、第29卷第5期菏泽学院学报2007年10月Vol.29No.5JournalofHezeUniversityOct.2007文章编号:1673-2103(2007)05-0079-04聚乙二醇诱导细胞融合影响因素探究X李秀兰,姜曰水(曲阜师范大学生命科学学院,山东曲阜273165)摘要:以鸡红血细胞为材料,聚乙二醇(Mr=4000)为诱导剂,研究不同的细胞密度、聚乙二醇体积分2+4数、Ca浓度等因素对细胞融合率的影响,结果显示:细胞密度为(3.0～4.0)×10/mL,聚乙二醇的体积分数2+为50%,Ca浓度为5
2、0mmol/mL时融合效果最好,融合率高达29.76%.关键词:鸡红血细胞;细胞密度;聚乙二醇;融合率中图分类号:Q2文献标识码:A自从20世纪70年代Kao和Michayluk用聚乙二8g,KCl0.4g,Na2HPO4·2H2O1.77g,NaH2PO4·2H2O醇(PEG,polyethyleneglycol)诱导大麦、大豆等植物原0.69g,葡萄糖2g,溶于1000mL蒸馏水中)的体积[1]生质体融合后,PEG法诱导细胞融合以其容易制比,配制不同体积分数的PEG溶液,通过控制CaCl2备、活性稳定、不需要
3、特别的仪器设备、操作简便等2+的量调节Ca浓度.优点,被普遍地应用于生物、遗传、医药等研究领1.2.2细胞融合[2～5]域.高体积分数、高相对分子质量的PEG会对细胞融合的具体操作过程参照徐承水等的方细胞产生毒性,是限制其被广泛应用的瓶颈,此外,[7]法.[6]由于该方法涉及的影响因素较多,进一步加大了1.2.3融合细胞的观察获得理想细胞融合率的难度,且PEG法诱导细胞融取细胞融合液进行滴片,在显微镜下观察不同合的影响因素尚未见详细报道.为此我们以鸡红血视野内细胞总数及融合细胞数,用细胞计数法统计细胞为材料,探讨
4、不同细胞密度、PEG体积分数、总融合率,每一处理连续重复3次,每次统计取5个2+Ca浓度和pH对细胞融合率的影响,以期确定获视野,最后取平均数分析各因素对细胞融合率的影得较高细胞融合率的各项指标的数据范围,进一步响.扩宽PEG诱导细胞融合的应用范围,并为PEG诱导1.2.4数据处理细胞融合在本专科实验教学中的应用提供参考依对试验数据进行方差分析,并用新复极差测验据.比较各处理间细胞融合率的差异显著性.1材料与方法2结果与分析1.1材料2.1不同细胞密度对鸡红血细胞融合率的影响取一龄公鸡静脉血,按常规方法制备鸡红血
5、细细胞密度是影响细胞融合的重要因素之一。[7]胞储备液.以不同体积分数的PEG(Mr=4000)PEG的体积分数为50%,细胞密度在(0.5～8.0)×为细胞融合诱导剂.410/mL范围内的实验结果,见表1.从表1可知,融1.2方法4合细胞密度为(3.0～4.0)×10/mL时融合效果最1.2.1细胞融合液的处理好,细胞融合率高达20.69%.可见,细胞融合率并采用血球板计数法将已洗涤纯化的鸡红血细胞非随细胞密度的增大而增高,调至合适的细胞密度悬浮液调成不同的密度,调节PEG和稀释液(NaCl是提高融合率的一个重
6、要步骤.X收稿日期:2007-07-04基金项目:曲阜师范大学校科研启动基金资助项目(2003)作者简介:李秀兰(1977-),女,山东高唐人,讲师,硕士,研究方向:细胞生物学及其教学.792007年菏泽学院学报第5期表1不同细胞密度对鸡血细胞融合率的影响4细胞密度/(10/mL)观察细胞数融合细胞数融合率/%差异显著性0.1～0.25223.92±1.21C1.0～2.045511.09±0.83B3.0～4.0531120.69±1.24A5.0～6.04249.76±1.38B7.0～8.04536.52±
7、1.46C注:差异显著性一栏的大写字母不同者表示细胞融合率在0.01水平上存在极显著差异.2.2不同体积分数的PEG对鸡血细胞融合率的影的体积分数成正比.不过PEG具有一定的毒性,且响其体积分数越大对细胞的毒性越大,极大地影响了[7]选择合适体积分数的PEG是PEG融合技术的融合率和融合后细胞的存活率,故PEG的体积分关键,体积分数在10%～70%范围内的实验结果列数一般在30%～50%.于表2.从表2可知,同一细胞密度下,融合率与PEG表2不同体积分数的PEG对鸡血细胞融合率的影响PEG体积分数/%观察细胞数融
8、合细胞数融合率/%差异显著性1040020.50±2.01B30741418.76±0.93A50721520.72±1.27A70771620.81±1.52A4注:细胞密度为(3.0～4.0)×10/mL;差异显著性一栏的大写字母不同者表示细胞融合率在0.01水平上存在极显著差异.2.3不同Ca2+浓度对鸡血细胞融合率的影响2+明,Ca浓度在0～50mmol/mL范围
