分离分析化学4-1色层分析法

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1、15七月2021色层分析法1第四章色层分析法15七月20212色层分析法提纲吸附层析分配层析亲和层析凝胶层析实验技术石油醚碳酸钙颗粒色素玻璃柱色层分析法最早始于1903年-茨维特的实验概述15七月2021概述1931年,R.Kuhn等人分离复杂的有机混合物1941年,英国学者Martin和Synge，分配层析概念以及液-液分配层析的塔板理论。分离乙酰化氨基酸混合物水饱和的硅胶——固定相含乙醇的氯仿——流动相液-液分配色谱15七月20215概述1944年,Consden、Cordon和Mactin，纸层析。1949年，Macllean

2、等，薄层色谱法。1952年，Martin和Synge，气液色谱法产生。Martin和Synge获得1952年的诺贝尔化学奖50年代开始,出现了气相层析、液相层析、高效液相层析、薄层层析、离子交换层析、凝胶层析、亲和层析等,层析法和其它技术的联用。15七月20216色层分析法是由流动相，带着被分离的物质流经固定相，在移动过程中，各种溶质受到固定相不同程度的作用，从而使试样中的各种组分分离。色层法应具备的因素或条件是：1.具有两相2.混合物中各组分的物理化学性质有差异3.多次冲洗或展开15七月20219柱层析：固定相装填在管中成柱形，在柱中

3、进行的层析分离；纸层析：利用滤纸作为固定相的层析分离；薄层层析：固定相在玻璃板、铝膜等支持物上铺成薄层的层析分离。按固定相的装填方式分类15七月202110根据分离的原理分类类型原理固定相常用操作方式吸附层析吸附力，疏水力和静电力硅胶Al2O3、活性炭、羟基磷灰石柱层析、薄层层析分配层析分配系数、溶解度硅胶、纤维素、滤纸、硅藻土纸层析、柱层析、薄层层析亲和层析生物分子亲和力带配基的琼脂糖、葡萄糖以及硅胶等薄层层析、柱层析凝胶层析排阻效应交联葡聚糖、琼脂糖柱层析离子交换层析离子间作用力树脂、离子型纤维素、葡聚糖等离子交换剂柱层析、薄层层析

4、15七月202111一．吸附层析（adsorptionchromatography）1.原理2.吸附剂的类型及其选择3.流动相及其选择15七月202112吸附在固体或液体内部或表面的选择性传递。溶质:被吸附的物质，吸附剂:固体材料1．原理15七月202113混合物随流动相通过吸附剂组成的固定相时，在固定相和流动相作用下发生吸附、脱附、再吸附、再脱附的反复过程，由吸附剂对不同物质的不同吸附力而使混合物分离的方法。吸附层析根据所用吸附剂和吸附力的不同，吸附色谱可分为：无机基质吸附色谱(多种作用力)疏水作用吸附色谱(疏水作用)共价作用吸附色

5、谱(共价键)金属鳌合作用吸附色谱(鳌合作用)聚酰胺吸附色谱（氢键作用)15七月202115吸附等温线：在一定温度下，某种组分在吸附剂表面达平衡状态时在两相中浓度的相对关系曲线。分配系数KD15七月202116吸附等温线线形非线形15七月2021172．吸附剂的选择高选择性以实现很好分离；高容量以减少吸附剂的使用量；对于快速吸剂具有很好的动力学和传递特性；具有化学和热稳定性；具有一定的机械强度和惰性；易于充填或铺层；抗污染性强；价格便宜。15七月202118活化吸附剂一般可分为极性和非极性两类。极性吸附剂：氧化物、氢氧化物和盐非极性吸附剂

6、：活性碳，硅胶等影响吸附剂性质因素：化学结构、吸附剂的溶剂化作用以及吸附剂的预处理、吸附剂的物理状态吸附剂对有机物的吸附作用有多种形式15七月202119非极性或弱极性有机物:范德华力，吸附较弱；极性有机物:偶极力或氢键作用，有时还有成盐作用。作用的强度依次为：成盐作用>配位作用>氢键作用>偶极作用>范德华力作用。有机物的极性越强，在氧化铝等上的吸附越强。15七月202120根据吸附剂和被吸附物质理化性质：极性强的吸附剂易吸附极性强的物质、非极性的吸附剂易吸附非极性的物质。为了便于解吸附，分离弱极性的组分选用极性强的吸附剂，分离极性较

7、强的组分应选用极性小的吸附剂。常用的吸附剂有Al2O3，硅胶，羟基磷灰石，聚酰胺等。吸附剂选择15七月202121（1）硅胶硅胶是由聚硅酸脱水制得的颗粒状吸附剂15七月202122活化：在１０５～１１０℃加热３０min活化不同形式（H/G/F）粘合剂（煅石膏：牢度差，不能用于分离无机物；羧甲基纤维素：牢度好，不能用腐蚀性显色剂；淀粉：不能用于分离有机物）硅胶具有微酸性，可用于分离酸性和中性物质，如有机酸、氨基酸、甾体激素、类脂，萜类及色素等物质，硅胶用量一般是样品量的３０～３６倍。硅胶15七月202123（2）氧化铝Al2O3是由Al(

8、OH)３脱水制得，Al2O3表面存在铝羟基Al－ＯＨ，Ｈ键作用。Ａl2O3可分为中性、酸性、碱性三种。中性氧化铝适用于醛、酮、酯、内酯化合物及某些苷的分离；酸性氧化铝适用于酸性化合物；碱性Ａl2O3适用于分