KJ 201909 食品中硼酸的快速检测 姜黄素比色法

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1、附件9食品中硼酸的快速检测姜黄素比色法（KJ201909）1　范围本方法规定了食品中硼酸的姜黄素比色快速检测方法。本方法适用于粮食制品、淀粉及淀粉制品、糕点、豆制品、速冻食品（速冻面米食品、肉丸、蔬菜丸）中硼酸的快速测定。2　原理本方法采用姜黄素比色法的原理，通过超声辅助用水提取样品中硼酸，用乙基己二醇-三氯甲烷溶液对样品中的硼酸进行快速的富集、萃取，利用硫酸与姜黄素混合生成的质子化姜黄与硼酸反应生成红色产物。溶液颜色的深浅与样品中硼酸的含量成正相关，通过色阶卡进行目视比色，确定样品中硼酸的含量。3　试剂与材料除另有规定外，本方法所用的试剂均为分析纯，水为GB/T6682规

2、定的二级水。3.1　试剂3.1.1　硫酸。3.1.2　无水乙醇。3.1.3　亚铁氰化钾。3.1.4　乙酸锌。3.1.5　姜黄素（CAS:458-37-7），纯度≥99%。3.1.6　冰乙酸。3.1.7　2-乙基-1,3-己二醇（色谱纯）。3.1.8　三氯甲烷（色谱纯）。3.1.9　硫酸溶液（1+1）：取等体积的硫酸（3.1.1）与水，将硫酸缓慢加入到水中，并用玻璃棒不断的搅拌，待冷却后装入塑料容器中。3.1.10　亚铁氰化钾溶液：称取10.6g亚铁氰化钾（3.1.3），用水溶解并稀释至100mL。3.1.11　乙酸锌溶液：称取22.0g乙酸锌（3.1.4），用水溶解并稀释至

3、100mL。3.1.12　2-乙基-1,3-己二醇-三氯甲烷溶液(EHD-CHCl3溶液)：称取2-乙基-1,3-己二醇(3.1.7)10.6g，用三氯甲烷(3.1.8)溶解并稀释至100mL，此溶液保存于塑料容器中。3.1.13　姜黄-冰乙酸溶液：称取姜黄素(3.1.5)40mg，溶于100mL冰乙酸(3.1.6)中，此溶液保存于塑料容器中，该溶液需临用新制。3.2　参考物质硼酸参考物质中文名称、英文名称、CAS号、分子式、相对分子质量见表1。表1硼酸参考物质中文名称、英文名称、CAS号、分子式、相对分子质量中午名称英文名称CAS登录号分子式相对分子质量硼酸BoricAc

4、id10043-35-3H3BO361.81.1　标准溶液配制1.1.1　硼酸标准储备液（1000μg/mL）：准确称取在硫酸干燥器中干燥5h以上的硼酸标准品适量，用水溶解并配制成1000μg/mL的标准储备液，保存于塑料容器中。1.1.2　硼酸标准溶液（100μg/mL）：取硼酸标准储备液10.0mL，加水定容至100mL，保存于塑料容器中。所配制溶液于0℃～4℃冰箱中可储存3个月。1.2　材料硼酸快速检测试剂盒，需在阴凉、干燥、避光条件下保存。2　仪器与设备2.1　电子天平：感量为0.01g。2.2　样品捣碎机。2.3　超声仪。2.4　离心机：转速≥4000r/min。

5、2.5　氮气吹干仪或空气吹干仪：温度控制≥60℃。2.6　涡旋振荡器。2.7　移液器：200µL、1mL、10mL。3　分析步骤3.1　试样的制备取适量样品，充分粉碎混匀。3.2　试样的提取准确称取混合均匀的试样2g（精确至0.1g），置于50mL离心管中，准确加水7mL，加入硫酸溶液（3.1.9）2mL，涡旋振荡提取1min后超声提取15min，期间振摇2～3次，加入0.5mL亚铁氰化钾溶液（3.1.10）与0.5mL乙酸锌溶液（3.1.11），混匀后于4000r/min离心5min(若离心效果不佳，可适当提高离心转速)，准确吸取1.0mL上清液于2.0mL离心管中，向离

6、心管中加入EHD-CHCl3溶液（3.1.12）0.5mL，上下颠倒振摇15～20次，静置分层（若有乳化现象，可低速离心），将上层溶液去除干净，取下层液体100μL于2.0mL离心管中，加入400μL姜黄素-冰乙酸溶液（3.1.13），再加入20μL硫酸溶液（3.1.9），于60℃～70℃水浴中氮气（或空气）吹至近干，加入1mL无水乙醇，振摇使残渣全部溶解，为待测液。注：粉丝、粉条等干基样品加入水和硫酸溶液后需浸泡15min，再进行后续处理。3.3　测定步骤将待测液与标准色阶卡目视比色，15min内判读结果。需进行平行试验，两次测定结果应一致，即显色结果无肉眼可辨识差异。注

7、：整个试验避免在阳光直射的地方操作。1.1　质控试验每批样品应同时进行空白试验和质控样品试验（或加标质控试验）。用色阶卡和质控试验同时对检测结果进行控制。1.1.1　空白试验称取空白样品，按照5.1～5.3步骤与样品同法操作。1.1.2　质控样品试验（或加标质控试验）1.1.2.1　质控样品硼酸质控样品：采用典型样品基质或相似样品基质模拟实际生产工艺生产的，含有一定量硼酸(可考虑基质本底最大可能硼酸量)，并可稳定保存的样品。样品需经参比方法确认质控样品中硼酸的含量。1.1.2.2　加标质控样品硼酸加标质控样品：准确