沙生冰草内生固氮菌固氮酶活性及促生性能测定

《沙生冰草内生固氮菌固氮酶活性及促生性能测定》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、常用玉米二环系比较试验实习生:阿不都米吉提指导老师:阿不来提沙生冰草内生固氮菌固氮酶活性及促生性能测定作者:阿依努尔.满力克学号:063135102班级:生物技术061指导老师:罗明（教授）内容简介:研究背景实验目的材料与方法结果与分析讨论研究背景禾本科草具有根系强大，保蓄水土效果好，抗干旱、耐贫瘠、耐盐碱，适口性好，耐践踏，再生能力强等优良特性，是牧草和草坪草的主要种类，在人工草地草地建设、天然草地修复、城市绿化和生态环境保护中具有重要的作用。内生固氮菌是近年来发现的存在于一些非豆科植物中不同于经典共生固氮和自生固氮的高效固氮体系。它们在宿主植物组织中传

2、导、定殖，避免了化合态氮的抑制和土著微生物的竞争，不仅表现出较高的固氮效率，还能通过分泌生长素、溶磷和增强植株抗逆性等机制促进宿主生长，在解决植物氮素来源，增强对环境的适应性上有着巨大的潜力，显示出良好的应用前景。1.从沙生冰草中筛选出固氮性能稳定，具有固氮、溶磷、分泌植物生长激素等多种促生性能的内生固氮菌株。2.为创制和应用禾草固氮多功能促生剂，促进禾草生长，增强抗逆性，加速治理修复退化草地，提高草地生产能力，加强草地良性生态循环提供科学基础。实验目的1.材料与方法1.1.1实验材料：新疆农业大学温室人工种植的沙生冰草（Agropyron）。1.1.2培

3、养基及缓冲液：营养琼脂培养基(NA)、多碳源低氮培养基(CCM)、阿须贝无氮培养基(Ashby)、无氮培养基(Nfb)、磷酸缓冲液(PBS)、PKO溶磷固体培养基、蒙古娜卵磷脂培养基。1.1.3仪器超净工作台，高压灭菌锅，培养箱，滤膜，注射器，常规组培用具。1.2试验方法1.2.1沙生冰草内生细菌的分离用表面灭菌法分离沙生冰草组织内生细菌。1.2.2沙生冰草内生固氮菌的筛选将分离得到的内生细菌菌株回接于Ashby和Nfb培养基上4-5次，确定能同时在Ashby和Nfb培养基上正常生长的菌株为备选的固氮菌菌株，待测其固氮酶活性。1.2.3内生固氮菌固氮酶活性

4、测定采用乙炔还原法测定。1.2.4溶磷性能测定(1)溶磷的定性测定采用溶磷圈法测定。(2)溶磷强度测定采用钼酸铵比色法测定。1.2.5分泌生长激素性能测定分泌生长激素IAA的定性、定量测定采用Salkowski比色法。2.结果与分析2.1沙生冰草内生固氮菌固氮酶活性测定结果从NA固体培养基上分离得到的内生细菌菌47株，回接于Ashby和Nfb无氮培养基上4-5次确定能正常生长的为20株。经固氮酶活性测定(表1)，不同分离菌株的固氮酶活性差异显著，在808-2035nmold-1mL-1之间。表1沙生冰草内生固氮菌菌株固氮酶活性（nmol·d-1mL-1）菌

5、株编号分离部位固氮酶活性（nmold-1mL-1）菌株编号分离部位固氮酶活性（nmold-1mL-1）BCEB1沙生冰草（叶）1785BCEB11沙生冰草（根）2338BCEB2沙生冰草（叶）1756BCEB12沙生冰草（根）1473BCEB3沙生冰草（叶）808BCEB13沙生冰草（根）1388BCEB4沙生冰草（叶）2035BCEB14沙生冰草（根）1097BCEB5沙生冰草（叶）1552BCEB15沙生冰草（根）1310BCEB6沙生冰草（叶）1642BCEB16沙生冰草（根）1140BCEB7沙生冰草（叶）1561BCEB17沙生冰草（根）1505

6、BCEB8沙生冰草（叶）1433BCEB18沙生冰草（根）1104BCEB9沙生冰草（叶）1453BCEB19沙生冰草（根）1224BCEB10沙生冰草（叶）1197BCEB20沙生冰草（根）10772.2溶磷性测定经测定20株内生固氮菌菌株中，具有溶解性能的菌株有16株，其中5株在Pikovaskaia’s培养基上产生透明圈，说明这些菌株可分泌一些酸性物质，并向周围的培养基中扩散，使菌落周围的磷酸盐[Ca3(PO4)2]溶解，即这些菌株具有溶解无机磷酸盐的性能。14株能将培养基中卵磷脂溶解，具有溶解有机磷的性能。溶解无机磷的菌株占总菌数的25%。溶解有机

7、磷菌株占总菌数的70%。溶磷菌株在PKO培养基上产生透明圈表2沙生冰草内生固氮菌溶解无机磷性能测定菌株号溶磷圈直径/菌落直径溶磷强度（ug/ml）BCEB91.222187.3BCEB121.250170.2BCEB161.25045.2BCEB171.286142.1BCEB181.313180.5实验中，进一步采用钼锑抗比色法对11菌株的溶磷强度进行了无机磷强度测定。5个菌株成功的测出结果，溶磷强度为45.2～187.3mgL-1。图1沙生冰草内生固氮菌溶解无机磷强度表3沙生冰草内生固氮菌溶解有机磷性能测定菌株编号菌落直径(mm)溶磷圈直径(mm)比值

8、菌株编号菌落直径(mm)溶磷圈直径(mm)比值BCEB1591.8