中药化学实验指导

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1、中药化学实验指导书目录第一节实验注意事项01第二节试剂的使用04第三节实验部分06实验一层析练习06实验二大黄中游离葱酿的提取、分离与检识10实验三秦皮中七叶甘、七叶内酯的提取、分离和鉴定13实验四芦丁的提取和鉴定15实验五葛根中黄酮类化合物的提取、分离及鉴定20实验六茴香瞇的提取分离和检识23实验七三七总皂貳;的提取和精制25实验八薯籁皂试元的提取分离与鉴定27实验九盐酸小槃碱的提取、精制及检识30实验十掌叶防已碱的提取分离及延胡索乙素的制备34实验T-一苦参生物碱的提取、分离与鉴定39实验十二中药化学成分的系统预试验43附录53第三节实验部分实验一层析练习层析法又称色谱法

2、，色层法或层离法。它是近几十年迅速发展起来的一种分离方法，具有设备简单、分离效果好、快速等优点，在许多领域屮都得到广泛应用。我们在对中草药进行分析研究时，层析法越來越成为必不可少的、基木的研究手段，因此我们必须熟练地掌握层析法。层析法按操作形式的不同可分为：薄层层析（TLC）,纸层析（PC）和柱层析（CC）o一、常用薄层板的制备（一）实验原理竣甲基纤维素钠（CMC—Na）和石膏（Gypsum,简称G）均为制备层析板常用之粘合剂，前者为一大分子有机化合物，可溶于水，借助其分子间的作用力而起到粘结作用，使吸附剂在一玻璃片上成一坚固的薄层。后者则是利用熟石膏吸水后凝固的性质而使吸附

3、剂粘结为一均匀、结实的薄层。（二）实验内容1、硅胶一竣甲基纤维素钠（CMC-Na）粘合板的制备:称取CMC-Na0.8克，溶于100毫升蒸谓水中，加热并充分搅拌至全溶。収上述溶液37亳升置研钵中，加入薄层层析用硅胶（200目以上）15克，研磨成匀浆，用药勺取一定量倒在薄板上并涂布均匀，然后轻轻振动，使薄层面平整均匀，平放，待阴干后，于烘箱中110C烘半小时，进行活化，活化后的薄层置干燥器中备用。2、硅胶G粘合板的制备：称取硅胶G5克，加蒸馆水15毫升，研辭均匀后，取三分Z—倾注在予先洗净晾干的玻璃板上，迅速振动玻璃板，使吸附剂薄层均匀平整，阴干后同上活化备川。注意:操作要迅速

4、，以免因石膏吸水凝固而影响薄层的均匀性。3、硅胶的活度测定：3」硅胶活度的测定：一般选用三种染料以薄层层析法进行。染料试样配方：二甲基黄、苏丹红、靛酚蓝各取40mg混溶于100ml苯中即可。操作：将上述混合液点于待测的硅胶G或硅胶CMC-Na薄层上，以苯为展开剂，展开10cm（约20mins）,三种染料应明显分离。如果靛酚蓝的色斑接近于起始线，二甲基黄的色斑位于薄层的屮间，苏丹红的色斑在靛酚蓝与二甲基黄的色斑之间，则可认为薄层板的活性符合通常使用的薄层要求。3.2硅胶活度的毛细管测定法：操作：取l・0X75cm毛细管一支，将毛细管一端灼烧加热封闭。取1个用于试剂瓶的滴帽，使吸

5、附剂进入毛细管内，除去滴帽即可，（或采用测熔点法加入吸附剂）。再用吸管吸1滴苯在毛细管开口端（其冃的是为了防止吸附剂从毛细管中掉下），切去毛细管的封闭端,从已被苯浸润的一端蘸取微量的0.5%的染料苯溶液。然后将毛细管放入盛有几亳升苯的容器中，展开,计算Rf值，从下表中查出吸附剂的活度级别。硅胶活度与Rf值的关系吸附剂含水最％Rf值级别硅胶00.15I30.2260.3390.44120.55I150.6511二、纸层析练习（-）实验原理纸层祈乂叫分配纸层析（PC）,是利用滤纸本身吸附的水分作固定相，所选用的展开剂作为流动相，根据不同极性化合物在该两相中的分配系数不同，随着展开

6、剂的不断移动，而将各化合物分离开。（二）实验内容1、点样：取15X3厘米中速新华滤纸一张，在距一端2厘米处用铅笔轻轻划一横线，作为起始线，在间隔1厘米处分别点上以下样站：①1%D—葡萄糖水液②1%L—鼠李糖水液。展开剂：正丁醇一醋酸一水（4:1:5,上层）显色剂：苯胺一邻苯二甲酸试剂喷后于105-110°C烤10分钟，糖显深浅不同的棕色斑点。支持剂：新华层析滤纸（中速,20X7cm）2、样站：板蓝根注射液或10%的板蓝根配成5%乙醇溶液对照品：精氨酸、亮氨酸、脯氨酸1%的水溶液展开剂：止丁醇：冰醋酸：水（4：1：1或者4：1：5的上层液）显色剂：0.2%讳三酮乙醉溶液操作：取

7、新华层析滤纸条，在距底边2—3cm处用铅笔画--条直线。并做四个等分点分别用毛细管点上适量样站或对照品溶液，待溶剂挥T后（可用电吹风吹干），将滤纸用细棉线悬吊在盛有展开剂的层析缸中，使滤纸下端与展开剂接触，上行法展开，至展开剂前沿离起始线15cm左右时取出，并用铅笔画下前沿位置。热风吹去其上展开剂后，喷显色剂，再加热至100°C左右显色。如需长期保存，此时可再喷2%硫酸傑水溶液固色。计算精氨酸、脯氨酸和亮氨酸的Rf值。三、硅胶柱层析练习（-）实验原理柱层析是中草药有效成分研究中的一种常'用分离方法。许多