鲍曼不动杆菌基因组全序列的研究

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1、毕业设计（论文）任务书题目：鲍曼不动杆菌基因组全序列的研究学生姓名学院名称专业学号指导教师职称一、原始依据鲍曼不动杆菌(Acinctobactcrbaumanii)是条件致病菌，属于不动杆菌属的一个菌种，它是一种不发酵糖类、氧化酶阴性、不能运动的革兰氏阴性杆菌。菌体大小为K1.5nmX1.5^2um,无芽胞无鞭毛，需氧，可在普通培养基上生长良好，最适温度37°C,但41〜44°C条件下亦能生长。在血平板上经18〜24h的孵育可形成圆形、灰白色、光滑的菌落。而且鲍曼不动杆菌具有复杂的抗原构造，包括菌体抗原以及荚膜抗原，根据抗

2、原的不同可以将鲍曼不动杆菌分为34个血清型。鲍曼不动杆菌的耐药机制主要为通过质粒介导、染色体突变、青霉素结合蛋白(PBPs)的改变使抗菌药物失去活性；基因型和耐药性有一定得相关性，菌株获得耐药基因成分如质粒、转座子等使得耐药性高的同时，基因型的条带也多而复杂。探究鲍曼不动杆菌多重耐药性及高耐药率的原因，有：1)鲍曼不动杆菌主要在医院感染标本中检出，而医院感染病原体耐药性较高；2)与广谱高档抗菌药使用有关，在鲍曼不动杆菌检出之前，几乎90%的病人使用过广谱抗菌药物；3)与细菌本身耐药有关，鲍曼不动杆菌被称为“革兰氏阴性的MR

3、SA”，对多种抗生素具有天然耐药性，其主要耐药机制是外膜微孔蛋白形成的通道小，从而导致外膜通透性低，抗菌药物不易进入。其多重耐药性和高耐药率给治疗带来了一定困难，导致较高的病死率。鲍曼不动杆菌具有显著的快速建立耐药性的能力，几十年内就可以建立多重耐药。目前鲍曼不动杆菌的耐药性日益严重，其中的部分菌株甚至对日前所有已知的抗生素均耐药，即“全耐药”的鲍曼不动杆菌。本实验的研究研究FI的是鲍曼不动杆菌基因组的全序列。利用基因测序技术测得鲍曼不动杆菌的基因组序列，利用软件进行缺失片段(gap)的拼接与组装,设计缺失片段的引物，利用

4、引物进行PCR扩增反应，从而得到缺失片段的碱基和碱基数，从而得到鲍曼不动杆菌基因组完整的序列。通过后期的基因组注释，分析这一条由数百万个4种碱基对线性排列而成的长链所包含的遗传信息，从而研究鲍曼不动杆菌的耐药机制，发现预防和治疗鲍曼不动杆菌引发的各种疾病的措施。二、参考文献[1]李影林主编•临床微生物学及检验[M].长春：吉林科学技术出版社，1991,309-310.[2]DevaudM,KayserFH,BachiB.Transponson-mediatedmultipleantibioticresistanceinac

5、inetobcterstrains[J].AntimicrobAgentsChemother,1982,22(2):32-33・[3]VilaJ,MarcosA,MarcoFetalAnvitroantimicrobialproductionofp-lactamsesaminoglvcoside-modifyingenzymesandchloramphenicolacctyltransferasebyandsuseptibilityofclinicalisolatesofacinctobactcrbaumannii[J].

6、AntimicrobAgentsChemother,1993,37(1):138.[1]ObaraM,NakacT.Mcchanismsofresistanceto卩-lactamantibioticsinacinctobactcrcalcoaceticus[J].JAntimicrobChemother,1991,28(6):791.[2]吴劲松，卢月梅，吴伟元等.鲍曼不动杆菌的感染分布及耐药性分析[J]・中国感染控制杂志,2004,3(3)：247—249.[3]王凌伟，陈升汶.不动杆菌微生物学耐药研究新进展[J].国

7、外医药抗生素分册.2004,25(3)：134—137.[4]练向群，林亚雷，刘丁等.重复片段引物PCR用于鲍曼不动杆菌分型研究[J].第三军医大学学报,2002,24(4)：437—438.[5]张军民，吴坚，陈民钧等.鲍氏不动杆菌5年耐药性监测结杲分析[J]•中华医学检验杂志,1999,22(1)：512-513.三、设计(研究)内容和要求木实验的研究目标是利用基因测序技术、PCR技术等确定鲍曼不动杆菌基因组的全序列，从而进一步研究鲍曼不动杆菌的致病机制。木实验的研究内容是利用primerprimer5.0设计PCR引

8、物的方法和原则，设计出GC含量、Tm值、引物长度等符合实验要求的引物；然后进行PCR扩增反应，根据引物设计的结果设计反应体系和反应条件，扩增后得到产量高，特异性强的PCR产物，通过对PCR产物的测序，根据测序后的序列和基因组图谱拼接出缺失片段的碱基，从而得到完整的鲍曼不动杆菌的基因组全序列。木实验的关键