微生物快速检测论文

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1、编号：090110P密级：三级学校代码：12709分类号：0906011丿I竽丿I.黑业境岛微生物快速检测课题组长：李正农学号：090601112小组成员（学号）:黄雅玲090601114洪晓祺090601129专业班级：09级药品质量检测技术1班教学部：检验科学与技术系指导教师：蔡尽忠职称：实验师答辩委员会主席：庄峙厦评阅人：黄华斌完成日期：2012年04月摘要大肠菌群是当前国内、外环境监测部门评价水体污染程度的公认指标和主要监测项目之一，细菌监测主要也是对这两个指标的监测。水质常规监测中，大肠菌群的检测多采用多管发酵

2、法，由于国标方法费时费力，在水样多并且时间紧的情况下，越来越不能满足实际监测的需要。本研究实验旨在建立一种快速检测的方法。通过大量对比实验，完成了初始接菌量与达到0.2吸光度所需时间呈现良好的线性关系，平行样达到0.2吸光度所用的时间基本一致。结果证明，该方法快速、简便检测出水样中大肠菌群数值，检测时间相较国标方法缩短了3/4。用这个方法与国标的多管发酵法进行比较，两种方法所测结果经统计学检验，无显著性差异。关键词：大肠菌群微生物快速检测多管发酵法1.引言2.材料与方法2.1.试验■■■2.2.试验样品22.3.主要试验

3、仪器及器材22.4.仪器设备22.5.试验试剂及培养基22.5.1.生理盐水的组成22.5.2.大肠菌群快速检测培养基成分22.5.3.邻硝基苯3-D-半乳毗喃糖甘(ONPG)培养基成分32.5.4.营养琼脂培养基的成分32.5.5•月桂基硫酸盐胰蛋白月东(LST)肉汤成分(LaurylSulfateTryptose,LST)⑷.32.5.6.(双料)月桂基硫酸盐胰蛋白腺(LST)肉汤成分⑷32.5.7.煌绿乳糖胆盐(BGLB)肉汤成分(BGLB-BrilliantGreenLactoseB订e,BGLB)[4]32.6

4、.大肠菌群的快速检测32.7.平板计数法确定初始接菌量42.8.测2.9.未知水样的大肠2.9.1.水样1(采白生活臭水沟水)快速检测方法的制备42.10.多管发酵法测定未知水样的大肠菌群52.10.1•大肠菌群的证实试验53•结果3.1•大肠菌群的吸光度与采样时间的关系图如（图3-1）所示62.2.平板计数法确定初始接菌量如（表3-1）所示6■■■2.3.达到0.2吸光度的时间与初始接3.4.大肠菌群快速检测线性图如（图3-2）所示73.5.未知水样的原液与吸光度和时间的相对应值如（表3-3）所示82.6.多管发酵法测

5、定未知水样的大肠菌群84.结论93.1.建立大肠菌群快速检测法93.2.大肠菌群快速检测法与国标法检测未知水样结果比对95.讨论10参考文献11致谢1.引言随着水环境问题的H益突出，人们对水环境的安全更加关注。大肠菌群在污染水体屮含量远高于其他肠道病原体，其数量越多，表示受到粪便污染的程度越大，表示肠道病原体侵入的可能性越大，水环境对人体健康风险也就越大。因此，人们对大肠菌群检测的耍求也越来越高⑴。所谓大肠菌群，是指在37C培养24h内能发酵乳糖产酸、产气的需氧或兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌的总称⑵，主要出肠杆菌科中四

6、个属内的细菌组成，即埃希氏杆菌属、柠檬酸杆菌属、克雷伯氏菌属和肠杆菌属。水的微生物学的检验，特别是肠道细菌的检验，在保证饮水安全和控制传染病上有着重要意义，同时也是评价水质状况的重耍指标。国家饮用水标准规定，饮用水中大肠菌群数每升不超过3个，细菌总数何:毫升不超过100个。基于底物-酶技术的大肠菌群的快速检测屮用到的底物是0NPG(0—Nitrophcnyl—B—D—galactopyranoside)o大肠菌群能产生一种酶一B—D—galactosidase□这种酶能够分解0NPG并释放出0NP分了，0NP分了将孵化介

7、质染成黄色，且在波长X=410nm处可以检测吸光度，溶于水，溶度可达15mg/mLo当黄色物质出现时，就标志着被检测的水体中有大肠菌群。根据黄色物质出现的时间的长短就能判断出水体受污染的程度叫多管发酵法是根据统计学原理，以大肠菌群最可能数(MPN)来表示试验结果的，是一种半定量的方法，同时也是大肠菌群检测最经典的方法山。在正常情况下，肠道小主要有人肠菌群、粪链球菌和厌氧芽胞杆菌等多种细菌。这些细菌都可随人畜排泄物进入水源，由于大肠菌群在肠道内数量最多。所以，水源中大肠菌群的数星，是直接反映水源被人畜排泄物污染的一项重要指

8、标。目前，国际上已公认大肠菌群的存在是粪便污染的指标。因而对饮用水必须进行大肠菌群的检查。传统的多管发酵法可运用于的水中人肠菌群检测，但操作繁琐复朵、所需时间长。微生物快速检测法通过研究微生物初始接菌量与达到0.2吸光度所需时间的关系，建立一种大肠菌群快速检测方法，该方法相对多管发酵法操作方便简单、快速，可缩短检测时