《疟疾诊断》ppt课件

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1、疟疾诊断技术曹俊疟疾室江苏省寄生虫病防治研究所全球疟疾形势每40秒就有1名非洲儿童死于疟疾！全球一半以上的人口都生活在疟疾流行区每年2亿多人感染每年80多万人死于疟疾主要因恶性疟主要为非洲儿童BillandMelindaGatesCallforNewGlobalCommitmenttoChartaCourseforMalariaEradication(3E)Topic:3EEliminationEradicationEndGatesFoundationMalariaForum,16-18October,Seattle.Science.2007De

2、c7;318(5856):1544-5.消灭疟疾！疟疾防控策略基本原则：早期诊断，规范治疗标准：疟疾病人在发生症状的24小时内接受正确、支付得起、规范的治疗。好处：治愈病人防止病情恶化减少传播临床诊断:根据症状实验室诊断:查见原虫直接检测原虫（形态学）显微镜镜检QBCmethod检测抗原快速诊断(RDT):HRP-2,pLDH,Aldolase分子诊断–PCR,Real-timePCRandLAMP…检测抗体免疫荧光抗体试验(IFA)酶联免疫试验(ELISA)疟疾诊断方法疟疾诊断疟疾诊断现场应用实验室临床诊断显微镜快速诊断分子生物学抗体检测RDT

3、PCRLAMPELISAIFA较常用金标准最有前景很敏感流行病学临床诊断常用于高流行区无需实验设备依据发热病史灵敏度不稳定特异性较差和类似症状疾病难以鉴别诊断1、显微镜镜检厚薄血片厚薄血膜的比较厚血膜裂解的红细胞血量较大0.25l血液/100视野血样较浓缩敏感性更高原虫密度计数较难进行虫株鉴别薄血膜单层，固定的红细胞血量较少0.005l血液/100视野更有利于形态鉴别需花更多时间读片密度低，较易漏诊抗体检测方法流行病学调查和监测，不能确诊抗原检测方法可作确诊快速免疫诊断试条(RDT)操作简单、快速,有望替代镜检2．免疫学检测Stagesofd

4、evelopmentofPlasmodiumfalciparumatwhichantigensdetectedbymalariarapiddiagnostictestsareproduced.靶抗原疟原虫乳酸脱氢酶pLDH泛种,恶性疟特异性,间日疟特异性抗体疟原虫死亡后即消失更准确反映原虫存活状态具有评估疗效的潜在价值三日疟，卵形疟依旧在研发中稳定性？恶性疟富氨酸蛋白HRP2只能用于恶性疟疟原虫死亡后依旧长时间存在间日疟特异性依旧在研发中醛缩酶Aldolase泛种特异性疟原虫死亡后即消失更准确反映原虫存活状态稳定性？快速免疫诊断试剂盒(RDTs)

5、工作原理如何使用RDT如何使用RDT如何使用RDT如何使用RDT如何使用RDT如何使用RDTRDTexample1:ParaSightFtestRDTexample2:OptiMalAssayKitRDTexample3:AmradICTRDT优点：1.快速便携2.无需专门设备采购RDT需考虑的因素：1.用于检测的虫株2.使用地区流行情况3.最终用户4.产品质量…WHO测试结果PfPvMalariaRapidDiagnosticTestPerformance-ResultsofWHOproducttestingofmalariaRDTs:Roun

6、d2(2009)常采用PCR方法检测特异性、敏感性优于镜检检测成本高于镜检主要用于特殊诊断和抗药性检测3．基因检测P.malariaeP.ovaleMarkerP.vivaxbpP.falciparumPCR检测检测样本：抗凝血(200µl)或滤纸血(5µl)检测灵敏性：全血血样：0.1parasite/µl滤纸血：2parasites/µl可鉴别虫株可检测药物抗性相关的基因突变不能进行原虫密度定量可用于流行病学调查需专门仪器设备，试剂和技术常用疟疾实验室诊断方法比较显微镜镜检免疫学快速诊断(RDTs)分子检测(PCR,LAMP)所需时间>1h<

7、30min普通PCR:>6h定量PCR:<1h检测灵敏度熟练技术人员:5–10p/uL普通技术人员:100p/uL100p/uL0.004–5p/uL敏感性和特异性依赖于镜检技术人员中等非常好虫株鉴定原虫密度低时较差差非常好定量金标准差普通PCR:不能定量定量PCR:可以定量技术要求较高较低较好费用0.12–0.40美元;低流行区高于RDT0.60–2.50美元设备:定量PCR>20,000美元;普通PCR和LAMP:约5000美元每次反应:0.35–5美元其它可以同时进行其它疾病的诊断，费工费力耐高温高湿，无需电力和专门设备，质量需进一步改进定

8、量PCR：封闭系统，可自动化操作流行区过于敏感？谢谢