实验九、细菌的荚膜染色

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1、实验九、细菌的荚膜染色法生命科学学院微生物学教研室－YJH实验的目的要求学习并掌握荚膜染色法生命科学学院微生物学教研室－YJH荚膜染色的基本原理荚膜是包围在细菌细胞外的一层粘液状或胶质状物质，其成分为多糖、糖蛋白或多肽。由于荚膜与染料的亲和力弱、不易着色，而且可溶于水，易在用水冲洗时被洗去。所以通常用衬托法染色,使菌体和背景着色，而荚膜不着色，在菌体周围形成一透明圈。生命科学学院微生物学教研室－YJH实验材料细菌培养物胶质芽孢菌2天无氮培养基琼脂斜面培养物。试剂绘图墨水1%甲基紫水溶液6%葡萄糖水溶液20%硫酸铜水溶液

2、甲醇香柏油二甲苯仪器和用具载玻片盖玻片滤纸显微镜镜头纸生命科学学院微生物学教研室－YJH方法湿墨水法干墨水法Anthony氏法生命科学学院微生物学教研室－YJH湿墨水法制备细菌墨水混合液加盖玻片镜检生命科学学院微生物学教研室－YJH制备细菌墨水混合液1、滴绘图墨水2、制备混合液绘图墨水滴1滴绘图墨水在载玻片中央挑取少量菌苔与生理盐水混合均匀涂布生命科学学院微生物学教研室－YJH加盖玻片在盖玻片上放一张滤纸，轻轻按压吸干多余混合液1、加盖玻片将盖玻片一端浸泡在细菌墨水混合液中缓缓盖上盖玻片2、吸去多余液体生命科学学院微生

3、物学教研室－YJH镜检1、镜检用低倍镜高倍镜观察制片置显微镜载物台上2、结果：背景灰色，菌体较暗，菌体周围荚膜呈现明亮透明圈。生命科学学院微生物学教研室－YJH干墨水法制备细菌墨水混合液涂片固定染色镜检生命科学学院微生物学教研室－YJH制备细菌墨水混合液1、滴生理盐水2、涂片6%葡萄糖在载玻片一端滴一滴6%葡萄糖水挑取少量菌苔混合均匀生命科学学院微生物学教研室－YJH涂片1、先将推片一端放在混合液上2、将推片向另一端平行滑动3、使混合液均匀铺成薄层4、干燥室温自然晾干生命科学学院微生物学教研室－YJH固定1、滴甲醇甲醇

4、滴甲醇浸没涂片1分钟2、固定倾去甲醇在酒精灯上方文火固定生命科学学院微生物学教研室－YJH染色1、滴甲基紫染液2、水洗不要直接冲菌膜可从玻片反面冲洗甲基紫染液甲基紫染液染色1-2分钟生命科学学院微生物学教研室－YJH镜检1、镜检用低倍镜高倍镜观察制片置显微镜载物台上2、结果：背景灰色，菌体紫色，菌体周围荚膜呈现明亮透明圈。生命科学学院微生物学教研室－YJHAnthony氏法制片固定染色镜检生命科学学院微生物学教研室－YJH制片、固定1、滴生理盐水2、涂片3、干燥固定生理盐水滴半滴生理盐水在载玻片中央挑取少量菌苔与生理盐

5、水混合均匀涂布室温自然晾干生命科学学院微生物学教研室－YJH染色1、滴孔结晶紫染液3、脱色结晶紫染液滴结晶紫染色2分钟20%CuSO4滴加20%CuSO4洗片生命科学学院微生物学教研室－YJH镜检1、镜检用低倍镜高倍镜观察制片置显微镜载物台上2、结果：背景灰色，菌体深紫色，菌体周围荚膜淡紫色。生命科学学院微生物学教研室－YJH