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时间：2020-03-23
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1、实验六细菌的荚膜染色法实验的目的要求学习并掌握荚膜染色法荚膜染色的基本原理荚膜是包围在细菌细胞外的一层粘液状或胶质状物质，含水量高，其成分为多糖、糖蛋白或多肽。由于荚膜与染料的亲和力弱、不易着色，而且可溶于水，易在用水冲洗时被洗去。所以通常用衬托法染色(负染色法),使菌体和背景着色，而荚膜不着色，在菌体周围形成一透明圈。也可采用Anthony氏染色法，用结晶紫使细胞和荚膜都着色，再用硫酸铜水溶液洗。荚膜被脱色，但硫酸铜吸附在荚膜上呈现淡蓝色，与深紫色的菌体区分。实验材料菌种胶质芽孢杆菌试剂绘图墨水1%甲基紫水溶液6%葡萄糖水溶液20%硫酸铜水溶液甲醇香柏油二甲苯仪器和用具载玻片盖
2、玻片滤纸显微镜镜头纸方法湿墨水法干墨水法(P78)Anthony氏法(P79)湿墨水法制备细菌墨水混合液加盖玻片镜检制备细菌墨水混合液1、滴绘图墨水2、制备混合液绘图墨水滴1滴绘图墨水在载玻片中央挑取少量菌苔与墨水混合均匀涂布加盖玻片在盖玻片上放一张滤纸，轻轻按压吸干多余混合液1、加盖玻片将盖玻片一端浸泡在细菌墨水混合液中缓缓盖上盖玻片2、吸去多余液体勿留气泡镜检1、镜检用低倍镜高倍镜观察制片置显微镜载物台上2、结果：背景灰色，菌体较暗，菌体周围荚膜呈现明亮透明圈。干墨水法制备细菌墨水混合液涂片固定染色镜检制备细菌墨水混合液1、滴葡萄糖溶液2、涂片6%葡萄糖在载玻片一端滴一滴6%
3、葡萄糖水挑取少量菌苔混匀后再加一环墨水，再次混匀涂片1、先将推片一端放在混合液上2、将推片向另一端平行滑动3、使混合液均匀铺成薄层4、干燥室温自然晾干固定、干燥甲醇固定，自然干燥甲醇滴甲醇浸没涂片1分钟倾去甲醇，室温自然干燥注意：固定及干燥均不能加热和用热风吹干，因为荚膜含水量高，加热会使其失水变形。同时，菌体失水收缩，会与周围染料脱离产生透明区，导致不产荚膜的细菌被误认为有荚膜。染色1、滴甲基紫染液2、水洗不要直接冲菌膜甲基紫染液甲基紫染液染色1-2分钟3、自然干燥镜检1、镜检用低倍镜高倍镜观察制片置显微镜载物台上2、结果：背景灰黑色，菌体紫色，菌体周围荚膜呈现明亮透明圈。An
4、thony氏法制片固定染色镜检制片、固定生理盐水1、滴生理盐水挑取少量菌苔与生理盐水混匀均匀涂布2、涂片滴半滴生理盐水在载玻片中央3、干燥固定室温自然晾干染色1%结晶紫染液1、滴孔结晶紫染液滴结晶紫染色2分钟3、脱色20%CuSO4水溶液镜检1、镜检用低倍镜高倍镜观察制片置显微镜载物台上2、结果：背景灰色，菌体深紫色，菌体周围荚膜淡紫色。
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