青藤碱对DC2.4细胞TLR2_TLR4-MyD88_TRIF信号通路的影响

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1、成都中医药大学2014级硕士学位论文成都中医药大学（基础医学院）二0一七届硕士研究生学位论文青藤碱对DC2.4细胞TLR2/TLR4-MyD88/TRIF信号通路的影响EffectofSinomenineonTLR2/TLR4-MyD88/TRIFsignalingpathwayinDC2.4cells研究生姓名：李文龙指导教师：高永翔学科专业：免疫学二○一七年五月1万方数据成都中医药大学2014级硕士学位论文学位论文青藤碱对DC2.4细胞TLR2/TLR4-MyD88/TRIF信号通路的影响Effectof

2、SinomenineonTLR2/TLR4-MyD88/TRIFsignalingpathwayinDC2.4cells李文龙指导教师姓名：高永翔申请学位级别：硕士专业名称：免疫学论文提交时间：2017年5月论文答辩时间：2017年6月3日本论文受资助基金：国家自然基金（NO:81173627）教育部博士点基金（NO:20105132110001）二○一七年五月2万方数据成都中医药大学2014级硕士学位论文中文摘要目的：探析青藤碱对DC细胞TLR2、TLR4受体的作用和对MyD88依赖信号途径或MyD88非依

3、赖信号途径的影响，进而明确青藤碱对DC细胞活化的抑制机制。从而推断青藤碱在治疗类风湿性关节炎过程中的关键作用点，为类风湿关节炎的治疗以及新药的开发提供实验室依据。方法：1、利用Western-Blot检测DC2.4细胞TLR2、TLR4、MyD88和TRIF的表达变化；2、qPCR实时荧光定量检测DC2.4细胞TLR2mRNA、TLR4mRNA、MyD88mRNA和TRIFmRNA的表达变化。结果：1、通过实验发现，LPS刺激后的DC2.4细胞模型组内TLR2、TLR4、MyD88和TRIF蛋白的表达与空白组

4、比较均有明显的升高，而青藤碱干预后的药物组上述相关蛋白的表达均有不同程度的下降；2、LPS刺激DC2.4细胞过高地表达TLR2、TLR4、MyD88和TRIF相应的mRNA，青藤碱作用于药物处理组后，其使得上述相关蛋白随之降低，如2-Ct值TLR2mRNA模型组表达量是空白组的3.50倍，青藤碱药物处理组是空白对照组的1.40倍，TLR4mRNA模型组表达量是空白组的1.47倍，青藤碱药物处理组是空白对照组的0.90倍，2-Ct值模型组MyD88mRNA的表达量是空白组MyD88mRNA的2.41倍，

5、青藤碱药物组MyD88mRNA是空白组的1.08倍。2-Ct值模型组TRIFmRNA的表达量是空白组TRIFmRNA的6.67倍，青藤碱药物组TRIFmRNA是空白组的1.43倍。结论：本实验结果提示：TLR2和TLR4在RA的病理机制中或许受到特异性抗原的同时刺激，进而活化其下游的MyD88依赖和MyD88非依赖两种信号途径，从而激活了抗原提呈细胞—DC细胞，DC细胞的异常活化和异常激活T细胞是RA疾病发生发展的核心病机。而青藤碱3万方数据成都中医药大学2014级硕士学位论文可以抑制TLR2/TLR4-

6、MyD88/TRIF信号通路，从而抑制DC细胞的活化而发挥治疗RA的药理作用。关键词：Toll样受体2、Toll样受体4、髓样分化因子88、β干扰素TIR结构域衔接蛋白、树突状细胞、类风湿性关节炎4万方数据成都中医药大学2014级硕士学位论文AbstractObjective:StudyontheeffectofsinomenineonTLR2andTLR4receptorofDCcellsandtheinfluenceofMyD88dependencesignalpathwayorMyD88non-depe

7、ndencesignalpathway,andthencleartheinhibitionmechanismofsinomenineonDCcellactivation.Thusinfersinomenineinthetreatmentofrheumatoidarthritis,thekeypointintheprocessofdevelopmentofnewdrugsforthetreatmentofrheumatoidarthritisandtoprovideevidenceofpharmacologya

8、ndmedicalaspects.Methods:1,usingWesternBlotmethodtodetectDC2.4cell’stheexpressionofTLR2andTLR4,MyD88andTRIF;2,real-timeqPCRfluorescencequantitativemethodtodetectDC2.4cell’sexpressionofTLR2mRNA,TLR4mRNA