基于ITS及cpDNA序列对川贝母复合群的多样性研究

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1、ChengduUniversityofTraditionalChineseMedicine（药学院）二0一七届硕士研究生学位论文基于ITS及cpDNA序列对川贝母复合群的多样性研究StudyongeneticdiversityofFritillariacirrhosaD.DonanditsrelatedspeciesbasedonnrDNAITSandcpDNAsequences研究生姓名：张礼指导教师：严铸云教授学科专业：生药学二○一七年五月万方数据学位论文基于ITS及cpDNA序列对川贝母复合群的多

2、样性研究StudyongeneticdiversityofFritillariacirrhosaD.DonanditsrelatedspeciesbasedonnrDNAITSandcpDNAsequences张礼指导教师姓名：严铸云教授申请学位级别：硕士专业名称：生药学论文提交时间：2017.04论文答辩时间：2017.05二○一七年五月万方数据成都中医药大学2017届硕士学位论文基于ITS及cpDNA序列对川贝母复合群的多样性研究研究生：张礼专业:生药学指导教师：严铸云摘要百合科（Liliaceae

3、）贝母属（FritillariaL.）包括许多重要的药用植物，多数种类的鳞茎具有清热润肺、止咳祛痰的功效。据记载该属约有130种，以地中海北岸、伊朗、土耳其等地区分布的种类最丰富。先后发表的中国贝母属的种及变种达100余个，《中国植物志》记载20种2变种；《四川植物志》记载43种和19个变种，其中四川产15种，4变种；《FloraofChina》记载有24种，4变种，其中15种属我国特有种；Plantlist数据库收录的国产贝母属植物有24种，1变种。国产贝母属植物在横断山脉地区种类最丰富，是川贝母的传

4、统产区，但其分类分歧较大。本研究通过分子系统学手段厘清贝母属物种的分类地位与系统发育关系，为贝母类药材基原的准确鉴定，保证其临床用药的真实性，指导川贝母资源的合理利用提供基础数据。主要研究结果如下：1筛选贝母属植物序列引物共88对，其中核基因组引物6对，叶绿体基因组引物39对，线粒体基因组引物43对。确定核基因组ITS、CHS序列和叶绿体基因组ycf15、rpoB-trnC、ycf4-cemA、trnS-trnG、rpl16、trnGintron、psbE-ORF31等7条序列作为贝母属植物分子鉴别序列

5、。2基于核基因组ITS、CHS序列和叶绿体基因组ycf15、rpoB-trnC、ycf4-cemA、trnS-trnG、rpl16、trnGintron、psbE-ORF31序列对贝母属植物20个物种共27个居群，每个居群3个个体测序，得到贝母属植物序列共计687条。基因序列分析，发现暗紫贝母F.unibracteata、长腺贝母F.unibracteatavar.longinectarea和瓦布贝母F.unibracteatavar.wabuensis的ycf15、ycf4-cemA出现大量碱基缺失，

6、可将其作为这3个物种（或变种）的特征鉴别序列。核基因及叶绿体基因序列分别进行了联合分析，表明长腺贝母F.unibracteatavar.longinectarea亲缘关系与暗紫贝母F.unibracteata极为接近，本研究结果支持《四川植物志》和《FloraofChina》将长腺贝母F.unibracteatavar.longinectarea作暗紫贝母F.unibracteata的变种处理。叶绿体基因组序列分析表明瓦布贝母F.unibracteatavar.wabuensis与暗紫贝I万方数据成都中

7、医药大学2017届硕士学位论文母F.unibracteata亲缘关系极为接近，核基因序列分析表明瓦布贝母F.unibracteatavar.wabuensis遗传分化距离与华西贝母F.sichuanica居群（BH）最近，其次与暗紫贝母F.unibracteata和华西贝母F.sichuanica居群（BHX）近。推测瓦布贝母F.unibracteatavar.wabuensis可能是以暗紫贝母F.unibracteata为母本，华西贝母F.sichuanica为父本形成的杂交种群；同时本研究结果支持P

8、lantlist数据库将瓦布贝母F.unibracteatavar.wabuensis作为暗紫贝母F.unibracteata变种。3利用本研究获得的贝母属物种与NCBI下载的全球60个贝母属物种的ITS、rpl16序列构建的系统发育树聚类结果，进一步支撑了Rix将贝母属修订为8个亚属的观点。研究结果表明，中国贝母属植物包括4个亚属，即多鳞亚属（Subg.Davidii），仅米贝母F.davidii1种；轮叶亚属(Subg.Liliorhi