基于its条形码序列对枸杞杂交种的早期鉴定

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1、基于ITS条形码序列对枸杞杂交种的早期鉴定　　摘要：采用改进CTAB法提取枸杞（LyciumLinn）叶片DNA，利用合成的特异引物对其DNA中nrDNAITS区进行扩增、克隆，对目的片段进行测序分析，以期利用ITS条形码序列对枸杞杂交种进行早期鉴定。结果表明，7份枸杞属不同种间杂交种的ITS序列长度变异范围为558～632bp，平均为610bp。排序后的总长度为632bp，整个转录间隔区（ITS1+ITS2）对位排列后总长度为478bp，共有138个变异位点，ITS1和ITS2分别为85和53个，占28.9%

2、；保守位点340个，占71.1%；有6个信息位点，占1.3%；51个转换位点，12个颠换位点，其中ITS1区的信息位点所占比例低于ITS2区，而ITS1区的转换位点与颠换位点比值高于ITS2区。通过对宁夏枸杞、北方枸杞、黑果枸杞及其种间杂交育种产生的杂交后代分析，得出基于ITS聚类分析能够初步判别杂交后代与父母本的亲缘关系与差异，可以作为早期鉴定枸杞属不同种间杂交种后代的方法之一。　　关键词：枸杞（LyciumLinn）；ITS序列；鉴定；杂交育种　　中图分类号：S567.1+9文献标识码：A文章编号：0439

3、-8114（2016）19-5075-03　　DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.19.045　　Abstract：ToidentifyLyciumLinnhybridsinearlytimebythenrDNAITSsequence，usingimprovedCTABmethodtoacquireDNAof6LyciumLinnleaf，nrDNAITSareaofDNAwaspropagatedandclonedbycompositespecialprimers，a

4、ndsequenceofthetargetsegmentwasanalyzed.TheresultsshowthatthelengthvariationrangeofnrDNAITSsequenceis558～632bpandtheaverageis610bp.Thelengthis632bpaftersortingandthetotallengthofITS（ITS1+ITS2）is478bpbyalignment，including138variationsites（85variationsitesinIT

5、S1and53variationsitesinITS2）whichoccupied28.9%，340conservedsitesaccountedfor71.1%.Thereare6informationsites，51transformationsitesand12transversionsitestotally，buttheproportionofinformationsitesinITS1islowerthaninITS2，andtheratiooftransformationsitesandtransv

6、ersionsitesinITS1ishigherthaninITS2.AccordingtoanalysisofL.ruthenicumMurr.，L.barbarumLinn.，L.chinenseandthehybridscrossbredamongthesespecies，wecouldjudgethegeneticrelationshipanddifferencebetweenhybridsandtheirparentsbasedonnrDNAITSsequence.Inconcluding，then

7、rDNAITSsequenceanalysisisonewaytoidentifyLyciumcrossbreedingamongspeciesinearlytime.　　Keywords：LyciumLinn；internaltranscribedspacer；identification；crossbreeding　　枸杞（Lycium6Linn）富含枸杞多糖、甜菜碱、类胡萝卜素、多种不饱和脂肪酸等多种有效成分，具有抗氧化、抗肿瘤、延缓衰老、增强免疫力、软化血管、降低血脂等功效，是中国重要的药食同源功能型特

8、色植物资源[1]。宁夏是枸杞的原产地和主产区，截至2015年底，宁夏种植规模达到5.71万hm2，占全国种植总面积的42.5%；枸杞干果产量13万t，占全国总产量的48%；年出口量6500t，出口额达7000万美元，分别占全国出口量和出口额的65%和58%；枸杞生产总值突破50亿元。宁夏自20世纪60年代就已开展枸杞新品种育种工作，目前宁夏农林科学院自主选育出宁杞1号、宁杞2号、宁杞3