基于its序列的pcr方法在铁皮石斛鉴定中的应用研究

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1、分类号学校代码密级公开学号硕士学位论文▲子岸列的方法在铁灰石斛鉴走中的危用研免学位申请人姓名沙鑫申请学位学生类别全制硕士申请学位学科门类理学申请学位学科专业植物学导师姓名、职称张苏啐到教提所属院（系、所）生命科学学晚完成日期年月分类号学校代码密级公开学号硕士学位论文泉子岸列的方法在铁犮石斜基走中的应用研免学位申请人姓名：沙鑫申请学位学生类别全制硕士申请学位学科门类理学申请学位学科专业植物学导师姓名、职称张苏斧到敉救所属院（系、所）生命科学学晚完成日期年月ApplicationStudyontheIdenti

2、ficationofDendrobiumofficinalewithPCRbasedonITSsequenceAThesisSubmittedinPartialFulfillmentoftheRequirementFortheMasterDegreeinLawByShaXinPostgraduateProgramInstituteofLifeScienceXinyangNormalUniversitySupervisor:ZhangSu-fengAcademicTitle:AssociteProfessor

3、SignatureApprovedMay.2015独创性声明本人声明，所呈交的论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得信阳师范学院或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。签名：日期：年少月日学位论文使用授权书本人完全了解信阳师范学院有关保留、使用学位论文的规定，即学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复

4、印件和电子版，允许论文被査阅和借阅。本人授权信阳师范学院可以将本学位论文的全部内容编入有关数据库进行检索，可以釆用影印、缩印或其他复制手段保存或汇编本学位论文。同时授权经信阳师范学院认可的国家有关机构或论文数据库使用或收录本学位论文，并向社会公众提供信息服务。保密的论文在解密后应遵守此规定）研究生（签名）：导师（签名）和务崎曰期年月曰摘要铁皮石斛，是兰科、石斛属多年附生草本植物，因其茎部表面呈“铁绿色”而得名。受生长周期长、长速迟缓、存活率低等因素的制约，野生铁皮石斛资源稀少，价格昂贵。一些石斛属的近缘植物

5、被加工成“铁皮枫斗”模样冒充铁皮石斛混入中药市场。科学、准确、快速、有效地鉴定物种是开展科学研究并加以利用的必要前提，在药用植物研究和应用领域这一工作显得更为重要。尤其是像我国这样的中草药利用率较高的国家，准确、高效地鉴定每一种药用植物，不仅关系到每一位用药者的身体健康，甚至可能影响到用药者的生命安全。本文选取铁皮石斛作为研究对象，首先，从石斛种质资源分布、药用性研究及临床实验等方面阐明铁皮石斛与其它石斛属植物的本质区别，阐明其在临床应用方面的重要作用。其次，结合我铁皮石斛产业现状，以铁皮石斛市场中存在的弄

6、虚作假、鱼目混珠现象为例，说明幵展铁皮石斛干品鉴定的紧迫性。并结合相关文献对现有的铁皮石斛鉴定方法进行简要说明，指明现有植物鉴定方法对于铁皮石斛鉴定的局限性，同时指出分子水平坚定方法的可靠性和高效性。最后，选用条形码中的序列（作为一种分子标记（，使用现有文献记录的植物核糖体基因中的序列通用引物对实验室已确定种源的两种铁皮石斛样品的模板进行扩增，对扩增之后的核苷酸序列进行回收、测序，结合从上获取的种不同产地的石斛属植物的条序列，对序列进行同源性比对分析，去掉序列两端的保守序列，再将分析结果与其他石斛品种的序列

7、进行多序列比对，应用多种生物信息学（软件对比对结果进行分析。制作石斛属植物的系统进化树、遗传距离图谱等，在此基础上进一步发掘铁皮石斛在序列非保守区的特异性序列。主要研究结论如下：通过对种石斛属植物的序列比对计算遗传距离和制作的进化树发现序列同源性极高，种不同产地的铁皮石斛遗传距离差距很小，进化树可以准确的将他们归为一类。而不同石斛属植物种间序列非保守区域内碱基排列顺序差异较为明显，与铁皮石斛差异明显。在铁皮石斛序列非保守区发现处比较明显的特异性序列，这段特异性序列长度适中，易于特异性引物设计。使用本次实验设

8、计的铁皮石斛特异性引物对实验室现有的种铁皮石斛(“”和“和种齿瓣石斛（紫皮石斛）进行特异性序列扩增，结果显示本次实验设计的铁皮石斛特异性引物，能够利用铁皮石斛模板增出明显的目的条带，而对照组齿瓣石斛则未能扩增出明显的目的条带，这说明该引物能够将铁皮石斛与齿瓣石斛区分幵来。关键词：铁皮石斛；序列；特异性引物AbstractDendrobiumofficinaleisakindofperennialcrawlingh