枝杆菌属、诺卡菌属、放线菌属鉴定

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1、微生物学检验第十章分枝杆菌属、诺卡菌属、放线菌属鉴定返回总目录本章内容第一节分枝杆菌属12第三节放线菌属3第二节诺卡菌属学习目标及重点学习目标：1.掌握结核分枝杆菌生物学特征，痰涂片抗酸染色及报告。2.熟悉结核菌素试验的临床意义；结核分枝杆菌和麻风分枝杆菌；星形诺卡菌的鉴别要点，诺卡菌与分枝杆菌、棒状杆菌的鉴别。3.了解结核分枝杆菌的致病物质；麻风分枝杆菌致病性；放线菌属的生物学特性、致病及免疫性本章重点：★结核分枝菌的生物学特性、培养特性★结核分枝菌的微生物学检验★结核分枝菌与其他分枝菌的鉴别第一节分枝杆菌属分枝杆菌属（Mycobacterium）概述是一

2、类细长弯曲的杆菌，因有分枝生长的趋势而得名主要特点细长弯曲，分枝状生长细胞壁含有大量脂质（分枝菌酸）常用抗酸染色鉴定，呈抗酸染色阳性（红色）引起疾病多呈慢性，且伴肉芽肿一、结核分枝菌(一)生物学性状1.形态与染色：G+（不易着色），细长略弯，分枝状，有荚膜，抗酸染色阳性。菌体外有荚膜2.培养特性营养要求较高，最适pH6.5～6.8，在罗氏（Lowenstein-Jensen，L-J）培养基上生长良好生长缓慢，14～18h分裂1次，在固体培养基上2～5w才出现肉眼可见的菌落典型菌落为粗糙型，表面干燥呈颗粒状，不透明，乳白色或淡黄色，如菜花样第一节分枝杆菌属结核

3、菌抗酸染色结果结核菌菌落第一节分枝杆菌属一、结核分枝菌３.生化反应不发酵糖类，触酶试验阳性，而热触酶试验阴性——加热68℃散失活性（区别非结核菌）烟酸合成试验、硝酸盐还原试验、吡嗪酰胺试验均阳性，可与牛型结核分枝菌鉴别４.抵抗力对乙醇、湿热、紫外线、抗结核药物（链霉素、异烟肼、利福平等）敏感对干燥、酸（3%HCl或6%H2SO4)或碱（4%NaOH)、碱性染料（孔雀绿、结晶紫）、青霉素等抗生素等有抵抗力第一节分枝杆菌属一、结核分枝菌５.变异性（１）形态结构变异：结核杆菌的L型：颗粒状（Much颗粒——病灶中革兰阳性非抗酸性）、丝状（２）毒力变异：卡介苗(BC

4、G)：Calmette和Guérin将牛型分枝杆菌经13年230次传代而获得的减毒菌株——活疫苗（３）耐药性变异：耐异烟肼及其他抗结核药物的结核菌株日益增多第一节分枝杆菌属一、结核分枝菌（二）微生物检验1.标本：根据感染部位的不同来采集不同的标本，最常用痰液标本2.标本前处理目前有酸（4%HCl）处理和碱（4%NaOH）处理两种方法3.检验程序第一节分枝杆菌属标本核酸检测接种固体培养基可疑菌落涂片抗酸染色镜检抗体检测慢性生长菌快速生长菌菌种鉴定标本前处理接种液体培养基接种小白鼠豚鼠脏器涂片镜检抗酸染色鉴定试验检验程序第一节分枝杆菌属一、结核分枝菌4.形态学检

5、查（高压灭菌后进行）（1）直接涂片染色镜检（2）浓缩集菌涂片检查法（3）荧光染色：观察形态黄绿色、橙色荧光（4）初步报告：检出抗酸分枝杆菌（结核杆菌？）第一节分枝杆菌属报告方式抗酸染色镜检结果-仔细检查300个视野未发现抗酸杆菌±300个视野内发现1~2条抗酸菌＋100个视野内发现1~9条抗酸菌2＋10个视野内发现1~9条抗酸菌3＋每个视野内发现1~9条抗酸菌4＋每个视野内发现9条以上抗酸菌一、结核分枝菌（5）报告方式第一节分枝杆菌属一、结核分枝菌5.分离培养L-J斜面或平板：生长缓慢，涂片抗酸染色快速培养系统：自动报告6.核酸检测：PCR法第一节分枝杆菌属

6、一、结核分枝菌(三)临床意义1.致病物质：主要与菌体成份有关。（1）脂质分枝菌酸：与抗酸性有关蜡质D:具有佐剂作用硫酸脑苷脂:阻碍吞噬磷脂:促类上皮细胞形成索状因子:与该菌毒力有密切关系第一节分枝杆菌属一、结核分枝菌（2）蛋白质诱发超敏反应（3）糖类抵抗吞噬作用2.所致疾病（1）经多途径感染，引起全身各组织结核病，以肺结核最多见（2）类型原发感染和继发感染3.免疫性抗结核免疫以细胞免疫为主※抗结核免疫属带菌免疫或称传染性免疫※抗结核免疫与Ⅳ型超敏反应同时出现第一节分枝杆菌属一、结核分枝菌4.结核菌素试验（1）原理用结核菌素进行皮肤试验，以检测受试者对结核杆菌

7、是否有细胞免疫及迟发型超敏反应的试验。（2）结核菌素试剂（PPD5单位）旧结核菌素（oldtuberculin，OT)，纯蛋白衍化物(purifiedproteinderivative，PPD)（3）结果48h-72h,根据注射部位是否出现红肿判断结果＜5mm为阴性≥5mm为阳性＞15mm为强阳性第一节分枝杆菌属一、结核分枝菌（4）结核菌素试验意义选择卡介苗接种对象、测定卡介苗接种后的免疫效果了解人群结核菌的自然感染率作为婴幼儿结核病的辅助诊断测定肿瘤患者的细胞免疫功能第一节分枝杆菌属二、麻风分枝菌1.生物学特性1873年挪威学者ArmauerHansen从

8、麻风患者皮肤结节中发现，又名Hansen杆菌，具抗酸