厚壳贻贝抗菌肽基因的真核表达【毕业论文】

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1、目录本科毕业论文（20届）厚壳贻贝抗菌肽基因的真核表达专业：生物科学目录目录摘要IAbstractII引言11材料与方法31.1实验材料31.2试验方法31.2.1引物设计及PCR扩增31.2.2myticin表达载体的构建与鉴定41.2.3表达载体的转化以及重组毕赤酵母的发酵61.2.4发酵产物的纯化与tricine-SDS-PAGE蛋白电泳检测72结果102.1目的基因的PCR扩增102.2真核表达载体的构建102.3重组表达质粒毕赤酵母表达产物的纯化与蛋白电泳分析11小结13参考文献15致谢17摘要摘要在抗菌肽研究中，贻贝抗菌肽占有重要的一席之

2、地，也是目前海洋生物抗菌肽研究的重点。贻贝是一种常见的海洋生物，其血清中富含各种具有杀菌活性的多肽成分。厚壳贻贝（Mytiluscoruscus）是我国东部海域广泛分布的具有重大经济价值的水产养殖贝类，其血淋巴中含有多种抗菌肽分子，但对于其抗菌肽的研究目前尚不多见。贻贝抗菌肽以其特殊的结构和高效抗菌活性而成为海洋生物抗菌肽研究的重要内容。但贻贝体内天然抗菌肽含量极低，采用固相化学合成成本昂贵，因此，利用基因工程技术对抗菌肽进行表达成为获得大量抗菌肽并进行后续研究的有效途径。在前期研究的基础上，我们以厚壳贻贝抗菌肽myticin-3为研究对象，pPIC

3、9K为载体，成功构建了myticin-3的真核表达载体，并将其电转化到毕赤酵母GS115中进行表达，表达产物纯化鉴定结果表明，厚壳贻贝myticin-3成熟肽基因在毕赤酵母GS115中成功表达。上述研究结果为进一步研究厚壳贻贝贻贝抗菌肽的抗菌机制和将来的开发利用以及采取基因工程手段批量表达厚壳贻贝抗菌肽myticin奠定了基础。关键词厚壳贻贝；myticin；真核表达；毕赤酵母GS11511浙江海洋学院本科毕业论文英文摘要AbstractAbstractIntheantimicrobialpeptidestudy,musselantimicrobia

4、lpeptidesoccupyanimportantplace,iscurrentlythefocusofthestudyofmarinebiologicalpeptides.Musselisacommonmarinelife,richinavarietyofserumbactericidalactivityofthepeptidewithcomposition.MytiluscoruscuswidelyspreadsallthroughthelittoralextentofEastChinaSeawithimportanteconomicvalue

5、.Abundantpeptideswithantimicrobialactivitywereidentifiedfromhemocytesofmusselinpreviouslyworks.Musselantibioticpeptidehasbeenincreasinglypopularinmarineantibioticpeptideresearchesforitsuniquestructuresandhighperformanceofantibacterialactivity.However,theabundanceofnaturalantibi

6、oticpeptideisextremelylowinmusselsandthecostofchemicalsynthesisisquitelarge,hencetherecombinantexpressionthroughgeneticengineeringbecomesareasonablewaytoobtainenoughantibioticpeptidesforfurtherresearches.Antibioticpeptidesmyticin-3fromMytiluscoruscuswaschosenastheresearchsubjec

7、tandtheeukaryoticexpressionvectorswereconstructedandtransformedintoPichiapastorisGS115followedbyexpression.Theidentificationofexpressionproductindicatesthatthegeneofmyticin-3wasexpressedsuccessfullyinPichiapastorisGS115.Theresultsaboveandfurtherinvestigationofthesedatamayleadto

8、betterunderstandingofmolecularresponsesofMytiluscorusc