剖析影响草鱼消化酶的因素

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1、剖析影响草鱼消化酶的因素1材料与方法实验饲料以大豆粕、次粉、米糠等配制全植物性基础饲料，在基础饲料中添加2%磷酸氢钙作为阳性对照组。饲料原料购自上海农好饲料有限公司，植酸酶活力为5000U/gg的草鱼和平均体质量为g的新吉富罗非鱼随机分入200L的塑料圆桶中，每种鱼分6个组，每组设置5个重复，每个重复20尾鱼。用上述对照饲料和实验饲料饱食投喂草鱼和罗非鱼，每天投喂2次，投喂量为体重的3%〜5%,随鱼体重量、天气及摄食情况加以调整。养殖周期为8周，养殖期间，水温25〜30°C,NH+4-NV/L,溶解氧＞5mg/L。样品的采集与处理养殖实验结束前饥饿Id后取样，每个重复随机取3尾鱼，每3

2、尾鱼合并成一个样本，取肝胰脏、肠、胃分别装入离心管中，置于一2(TC保存。酶活测定时，的磷酸盐缓冲液与所取内脏样品以9:1［体积：重量］移入匀浆管，按2000r/min的速度在匀浆机上匀浆,4000r/min4°C离心lOmin,取上清，置于4°C保存备测，24h内测完。消化酶比活力的测定蛋白酶活力采用福林-酚法测定，总蛋白试剂盒购自迈瑞公司。蛋白酶比活力定义:在pH=°C条件下，组织中每克蛋白lmin水解酪素产生lug酪氨酸定为一个蛋白酶比活力单位。淀粉酶比活力采用碘-淀粉比色法测定，试剂盒购自南京建成生物工程研究所。淀粉酶比活力定义：组织中每克蛋白在pH二温度37°C条件下与底物作

3、用30min,水解10m£淀粉定义为一个淀粉酶比活力单位。数据处理实验数据用平均值土标准差表示。用软件进行统计，先进行单因素方差分析，影响显著者再进行Duncan，s多重比较，PV表示差异显著。2结果植酸酶对草鱼和罗非鱼淀粉酶比活力的影响表3显示,草鱼肠淀粉酶比活力各组之间无显著差异。草鱼阳性对照组肝胰脏淀粉酶比活力显著高于阴性对照组，但与1000U/kg和2000U/kg植酸酶实验组差异不显著;肝胰脏淀粉酶比活力lOOOU/kg植酸酶实验组比阴性对照组、250U/kg和500U/kg植酸酶实验组分别提高％、％和%;2000U/kg与lOOOU/kg植酸酶实验组肝胰脏淀粉酶比活力差异不

4、显著:250U/kg和500U/kg植酸酶实验组肝胰脏淀粉酶比活力比阴性对照组略有升高，但差异不显著。罗非鱼肠淀粉酶比活力阴性对照组显著低于阳性对照组；250U/kg和500U/kg植酸酶实验组比阴性对照组略有升高，但差异不显著;lOOOU/kg和2000U/kg植酸酶实验组淀粉酶比活力比阴性对照组分别提高了％和％。肝胰脏淀粉酶比活力各组之间差异不显著。胃淀粉酶比活力，植酸酶实验组与阳性对照组差异不显著，但均显著高于阴性对照组，250U/kg.500U/kg.lOOOU/kg和2000U/kg植酸酶实验组比阴性对照组分别升高％、％、％和％。植酸酶对草鱼和罗非鱼蛋白酶比活力的影响，草鱼肠

5、蛋白酶比活力250U/kg和500U/kg植酸酶实验组与阴性对照组差异不显著;1000U/kg和2000U/kg植酸酶实验组比阴性对照组分别提高了％和％,且与阳性对照组无显著性差异。草鱼肝胰脏蛋白酶比活力250U/kg植酸酶实验组比阴性对照组提高%;500U/kg.lOOOU/kg和2000U/kg植酸酶实验组比阴性对照组分别提lOOOU/kg植酸酶实验组比阳性对照组提高％。罗非鱼肠蛋白酶比活力各实验组之间均无显著性差异。罗非鱼肝胰脏蛋白酶比活力各植酸酶添加组与阴性对照组相比均无显著性差异;lOOOU/kg和2000U/kg植酸酶实验组可以达到阳性对照组水平。罗非鱼胃蛋白酶比活力250

6、U/kg>500U/kg植酸酶实验组略高于阴性对照组；lOOOU/kg和2000U/kg植酸酶实验组显著高于阴性对照组%和％,但与阳性对照组差异不显著，4个植酸酶实验组之间差异不显著。3讨论植酸是植物细胞壁的组成成分，植酸酶的添加能破解细胞壁，水解植酸，消除其对消化酶的抑制作用，促进消化酶和底物的作用；植酸酶作为外源酶，适量添加能够促进内源酶的分泌；同时植酸酶添加前后磷的吸收量变化也会因鱼体内的能量代谢影响鱼类消化酶的代谢过程。酸、碱、重金属等是蛋白质立体结构的破坏体，二价金属离子如ca2+、mg2+、Fe2+等对消化酶具有抑制作用。但不同的金属离子对肝胰脏淀粉对不同部位消化酶的影响也

7、不同。随着植酸酶添加量的增加，原被螯合的金属离子和重金属离子被释放，且浓度越来越高，成为抑制剂或激活剂。本研究发现，植酸酶对草鱼和罗非鱼的消化酶比活力的影响随着酶量和消化系统部位的变化而变化，如淀粉酶比活力在草鱼肝胰脏中和罗非鱼肠中变化显著；而蛋白酶比活力除在罗非鱼肠中变化不显著外，在罗非鱼的肝胰脏、胃以及草鱼的肠、肝胰脏变化显著，可能是植酸酶释放了被植酸络合的金属离子，这些金属离子对草鱼和罗非鱼各部位消化酶的影响不同所致。当植酸酶超过一定量后