分子诊断学（精品）

《分子诊断学（精品）》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、名词解释1、基因：基因是一段携带功能产物(多肽，蛋白质，tRNA和rRNA和某些小分子RNA)信息的DNA片段，是控制某种性状的的遗传单位。基因诊断：指利用现代分子生物学和分子遗传学方法，通过检测基因的结构或表达功能的界常，对人体状态和疾病作出诊断的方法和过程基因组(genome):指生物体的一套完整的单倍体遗传信息。基因组学分类1.根据研究的重点分类：结构基因组学，功能基因组学，比较基因组学2.根据研究对象分类：肿瘤基因组学、植物基因组学、药物基因组学、环境基因纽学等基因组学的主要研究内容结构基因组学(structuralgenomics)：通过基因作图、核

2、苜酸序列分析确定基因组成、基因定位的科学。功能基因组学(functionalgenomics)：利用结构棊因组学捉供的信息，进行基因和非基因序列功能的研究。比较基因组学(comparativegenomics)：比较不同牛物间基因和基因组结构的差界，以增进对基因功能的了解、阐明物种进化关系2、类核：原核生物基因组DNA位于细胞的屮央区，与支架蛋口和RNA结合在一起，以复合体的形式存在，经高度盘旋聚集形成-个较为致密的区域，称为类核。3、质粒：是细菌细胞染色体以外的能独立复制并能稳定遗传的共价闭合坏状DNA分子。1.质粒的结构通常冇三种构型：共价闭环DNA分子半

3、开环DNA分子线性DNA分子2.质粒的理化性质：具有核酸分子的一般理化特性如可嵌入某些染料(EB,漠化乙锭)具有较强的抗切割和抗变性的能力4、重叠基因(overlappinggene)：病毒基因组的•段DNA序列有两个或两个以上的开放读码框架，可以编码两种或两种以上的多肽链，称为重叠基因。单核昔酸多态性(SNP)：由于单个碱展的变界引起的DNA序列多态性，在特定核卄酸位宣上存在两种不同的碱基，其屮最少一种在群体屮的频率不小于1%SNP的主要内容：1、疾病的连锁分析和基因的定位2、知道用药和药物设计3、用于进化和种群多样性的研究病毒基因组的特点：1.基因组大小相

4、差很大2.核酸结构多样性：DNA或RNA,单链或双链，环状分子或线性分子3・基因纽有连续的，有不连续的4.编码序列＞90%5.基因有连续的和间断的(有内含子)6.基因重醛7.—些病毒基因组的末端具有特殊的序列结构：帽了和poly(A)尾；末端重复序列：正向、反向、LTR；粘性末端8.多为单拷贝,逆转录病毒除外分段基因组是指病毒基因组山数条不同的核酸分子组成。蛋白质与核酸间相互作用的目的在于：对基因表达进行调控。蛋白质之间相互作用的形式：分了和亚基的聚合、蛋门分了杂交、分了识别、分了H我装配,多酶复合体核酸分离提取的原则：1•保证核酸一级结构的完整性：2.尽量排

5、除其他分子的污染，保证提取核酸的纯度；重组DNA技术：是指在体外利用酗学方法将H的DNA片段打能自主复制的载体分了连接，形成重组DNA分子，然后将重组DNA导入宿主细胞中复制、扩增，从而获得单一DNA分子的人量拷贝。限制性核酸内切酶(restrictionendonuclease,RE):是识别DA的特升序列，并在识别位点或其周围切割双链DNA的一类内切酶。5、载体(vccts):是指能携带目的基因进入宿主细胞进行扩增和表达的一类DNA分子。影响酶切反应的因素：底物DNA的纯度、反应系统、反应体积、保温时间与温度克隆载体(cloningvector)为使插入

6、的外源DNA序列被扩增而特意设计的载体称为克隆载体。克隆载体应具备的主要特点：至少有一个复制起点；至少有一个选择性标志；有适宜的限制性内切酶的单一切点：称为多克隆位点；应冇较高的拷贝数。常用克隆载体：质粒；噬菌体；黏粒重组DNA应用领域：基因诊断，基因治疗，基因工程药物，基因敲出和转基因技术体外基因扩增技术常用策略：1.靶基因扩增系统：聚合酶链反应(PCR)转录依赖的扩增系统(TAS)链替代扩增(SDA)2.探针扩增系统：连接陆链反应(LCR)QB复制腮(QBR)体系3•信号放大系统:分支DNA(bDNA)杂交捕获系统(-*)PCR反应体系1.模板单、双链DN

7、A均可。不能混有蛋白酶、核酸酶、DNA聚合酶抑制剂、DNA结合蛋白类。DNA模板：质粒DNA10ng；基因组lOOOng。模板浓度过高会导致反应的非特异性增加。2.引物引物长度：18-40nt碱基：G+C含量：40-60%,碱基分布的随机性引物自身：防止发夹样结构引物之间：防止二聚体引物的3,端：严格要求配对引物的5,端：可被修饰引物的特异性：3.耐热DNA聚合酶4•脱氧核昔三磷酸(dNTP)5、缓冲液PCR衍生技术：原位PCR；逆转录PCR；反向PCR；多重PCR:标记PCR；巢式PCR；任意引物PCR6、转化：把带有目的基因的重组质粒DNA引入受体细胞的过

8、程称为转化7、Ct值：指在PCR扩增过