灭菌与消毒指示器材鉴定试验

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1、灭菌与消毒指示器材鉴定试验CM2.1.6.1压力蒸汽灭菌生物指示物鉴定试验2.1.6.1.1g的测定压力蒸汽灭菌生物指示物所含菌量，以及在121°C土0.5°C饱和蒸汽作用下的存活时间、杀灭时间与D值是否达到要求指标。2.1.6.1.2实验器材(1)压力蒸汽灭菌生物指示器材抗力检测器(biologicalindicatorevaluatorresistometer,pressuredsteamster订ization,BIER,下简称抗力检测器)。对抗力检测器要求的技术指标：时间控制以秒为单位；温度控制以0.1°C为单位;加

2、热至预定温度的时间应WIOs；排气时间W5s；试验期间柜室内温度误差W±0・5°C。(2)56°C〜60°C温箱。(3)浪甲酚紫蛋白腺培养液(嗜热脂肪杆菌芽胞恢复培养基，见附录A)。(4)嗜热脂肪杆菌芽胞恢复琼脂培养基(见附录A)。(5)眼科银子(夹取菌片用)。(6)磷酸盐缓冲液(PBS,0.03mol/L,pH7.2)。(7)回收液(含0.1%吐温80的PBS液)。2.1.6.1.3牛物指示物微牛物含量与抗力标准(1)嗜热脂肪杆菌(BacillusstearothermophilusATCC7953或SSTK31)芽抱。回

3、收菌量为5X105cfu/片〜5X106cfu/片，或5X105cfu/ml-5X106cfu/mlo(2)在121°C±0.5°C饱和蒸汽条件下，存活时间23.9min,杀灭时间W19min。(3)在121°C±0.5°C饱和蒸汽条件下，D值为1.3min〜l・9min。6.1.4生物指示物含菌量的测定随机抽取3个生物指示物样本。样本如为菌悬液式指示物，直接用PBS作适当稀释后，按2.1.1.3规定进行活菌培养计数即可；样本如为含菌载体式指示物(如菌片)，应先置回收液中洗下芽砲，并以PBS稀释至适当浓度，再进行活菌计数培养

4、。培养温度为56°C〜60°C,24h观察结果。培养基仍用营养琼脂培养基。检测菌量符合2.1.6.1.3者为合格。2.1.6.1.5存活时间和杀灭时间的测定下以生物指示管的测定为例：(1)试验按作用时间分为3.9min和19min两组，各组测定20个样本。(2)先将抗力检测器的电热蒸汽发生器加满蒸憾水，以不超过最高水位为度。(3)接通检测器电源，预热，使达到预定蒸汽压。⑷设定灭菌温度(121°C土0.5°C)和作用吋间。(5)启动抗力检测器工作程序，使自动运行两个循环，以保证柜室等得到充分的预热。(6)将生物指示管(每批放2

5、0个样本)放专用载物架上并置抗力检测器柜室中，保证每个样木都可充分暴露于蒸汽中。(7)关闭栢门，先设定一组所规定的灭菌吋间。(8)启动抗力检测器工作程序，使自动进行抽真空一柜室加热一灭菌处理一排气。(9)打开柜门，取出生物指示管。仃0)紧接着重复(5)〜(9)的程序进行另一组的测定。(11)取出的生物指示管应尽快(勿超过2h)放入56°C〜60°C温箱，培养7d,观察最终结果。(12)测定结果,3.9min组(存活时间组)20个生物指示管均有菌生长;19min组(杀灭时间组)20个牛物指示管均无菌牛长时，可判为合格。其中一个

6、组或两组各有一个样本未达规定要求，可再用4组样本重复试验(3・9min和19min组各测试2次)。重复试验屮，如各样本均达规定要求，仍可认为合格。［对生物指示菌片测定时，操作程序与判断标准与上述生物指示管基本相同，只是将单片菌片装于牛皮纸袋中，以防灭菌时被冷凝水浸湿。此外灭菌完毕，需将样木分别接种于漠甲酚紫蛋白腺培养液中培养，7d观察最终结果］。2.1.6.1.6D值的测定(1)随机抽取50个样本，在Omin〜20min范围内分成10个作用时间组进行试验。每组5个样本。作用时间递增幅度，可根据预备试验结果适当变动(最长时间必

7、须达到使菌全部死亡的作用时间)o(2)将各组样木按2.1.6.1.5(2)〜(10)所示程序，分次进行灭菌处理。(3)灭菌完毕，按2.1.6.1.4所示对各组样本随机抽取3个进行活菌培养计数。(4)计算每个作用时间样本上平均存活芽抱数的对数值。以作用时间为横坐标(X),存活芽抱数的对数值为纵坐标(Y),算出芽砲存活与作用时间的回归方程(Y=a+bX)o(5)计算各实际测定值与直线回归方程的相关程度(相关系数)。(6)根据所得直线冋归方程式，计算出减少90%芽孑包数所需的作用时间(D值)。D值符合2.1.6.1.3者为合格。2

8、.1.6.1.7稳定性试验(1)在规定的贮存条件下，存放足量产品。(2)按使用说明书规定的有效期限抽样检测，先观察外观，特别注意指示剂中的培养液颜色有无变化。(3)在外观正常情况下，进一步按2.1.6.1.4、2.1.6.1.5所示方法测定活菌数量、存活时间、杀灭时间。菌量数下降＜50%,