丙型肝炎病毒核心蛋白与信号转导及转录活化蛋白3的相互作用

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1、丙型肝炎病毒核心蛋白与信号转导及转录活化蛋白3的相互作用颜学兵，傅涓涓，季芳，汪莉萍.梅蕾，潘修成，韩方正.张言超（徐州医学院附属医院感染性疾病科，徐州，221002）摘要：为了观察丙型肝炎病竜（HCV）核心蛋白（CORE）对信号转导及转录活化蛋白3（STAT3）表达的影响，寻找CORE与STAT3相互作用的功能区域°对Huh-7、转染表达CORE的Huh7和含有全长HCV基因的复制子（Replicon）Huh-7的STAT3及磷酸化STAT3（p-STAT3）表达水平作比较；并对CORE与STAT3进行免疫共沉淀试验、谷胱甘肽S转移酶（GST）结合试验。结果显示，

2、CORE能直接结合并诱导STAT3和p-STAT3表达，不同病當株CORE及CORE不同功能区域结合STAT3和"STAT3能力不同，CORE结合于STAT3主要依耐于CORE的N端的1〜126氨基酸。因此，CORE与STAT3的相互作用可能是HCV感染又一新的分子致病机制，在引起HCV持续感染和肝细胞癌的发病机制中起重要作用。关键词：丙型肝炎病毒；核心蛋白,信号转导及转录活化蛋白3中图分类号：R512.6文献标识码：A文章编号：100卜2478（2006）05-0398-05丙型肝炎病毒（HCV）是肝硬化（LC）和肝细胞癌（HCC）主要病因HCV是正链的RNA病毒

3、.含有9600碱基.编码3010氨基酸（aa）・通过细胞和病毒的蛋白酶裂解成3〜4个结构蛋白和至少6个非结构蛋白，其中核心蛋白（CORE）能影响宿主细胞生长、恶性转化和凋亡等多种生物学功能。不同区域的CORE在HCV致病机制中所起作用不同。我们以前研究发现N端1〜58aa能直接结合于蛋白激酶R「"，而59〜126aa区域对于CORE的二聚体的形成起重要作用。Kato等⑶发现在所有HCV和乙型肝炎病毒蛋白中.CORE是最具有信号诱导潜能的蛋白，可以影响和干扰亮氨酸拉链信号通路⑷。过度表达的CORE能与H・ras协同诱发小鼠成纤维细胞的恶性转化.在转基因表达CORE的小

4、鼠可诱发HCC⑸，因而CORE被认为是致癌蛋白，但CORE本身转化细胞的潜能较小，其诱导细胞恶性转化或致癌过程可能有其他因子的协同作用。信号转导和转录活化蛋白（STAT）家族在介导细胞信号转导中起关键作用.其中STAT3被认为是癌性转录因子，可以介导多种不同的生理和病理过程。磷酸化的STAT3（p-STAT3）可以形成二聚收稿日期：2006-05-24»履回日期：2006-06-26墓金项目：江苏省教育厅课題资助项目（O5KJB32O137）作者简介：顏学兵（1967•八禺・副教授，副主任映师.博士.主要从事利旅性肝炎研究.体或异聚体・并转移到核内，发挥其调节转录

5、的功能。STAT3信号转导系统的功能失调.可导致细胞恶性转化。Tannapfel等⑷发现由HCV感染导致的HCC癌中心STAT3表达明显高于癌旁组织.并处于组成性激活状态，P-STAT3可以激活c-fos.c-jun的表达.但未发现STAT3的基因突变.因而STAT3处于组成性激活的机制到目前仍不清楚。CORE可以通过干扰JAK-STAT信号通路⑺，而影响HCV感染后的结果.然而CORE介导JAK-STAT具体机制尚不明了。我们采用免疫共沉淀试验及谷胱甘肽S转移酶（GST）结合试验来研究CORE是否与STAT3直接作用及相互作用的功能区域.试图从分子水平了解不同病毒

6、株的不同片断COKE结合并激活STAT3的机制.为临床防治HCV感染为提供新的手段。1材料与方法1.1质粒的构建及表达7个表达不同的GST・HCV核心融合蛋白质粒分别为：BT：1〜172aa（编码N端1〜172aa）、1〜126aa（编码N端1〜126aa）%1〜58aa（编码N端1〜58aa）.59〜126aa（编码59〜126aa）、127〜172aa（编码127〜172aa）,BNT：1〜172aa（编码N端1〜172aa）,C191（为HCV-J：基因lb型儿I〜172aa（编码N端1〜172aa）。BT、BNT分别代表含有癌中心株及癌旁病毒株核心区基因序列

7、(从一例由单纯HCV感染导致LC并发HCC病人的癌中心及癌旁组织中克隆获得)的PGEX-4T-1表达的核心蛋白表达质粒。质粒的构建及表达参见图1及文献［8］进行。12细胞培养及转染Huh-7及含有HCV全长基因复制子(Replicon)的Huh-7(由Barterschlager惠赠)用DMEM培养基培养，加入10%胎牛血清，100U/m〔的青鑼素，10%非必诸氨基酸，100pg/ml链霉素，plasmocinQ.2pl/mbRepliconHuh・7另加G-418250碍/ml。干扰素(IFNp,Roche公司)诱导STAT3表达：、2X1()6培养于10cm