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1、第35卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究简报第8期2007年8月ChineseJournalofAnalyticalChemistry1187～1190毛细管电泳紫外检测法测定莲须中的槲皮素、木犀草素、山萘酚、异槲皮甙31,21,2222荆瑞俊姜小莹侯书荣李向军袁倬斌12(河南科技学院化学化工学院,新乡453003)(中国科学院研究生院化学与化学工程学院,北京100049)摘要采用毛细管区带电泳紫外检测法(CZE2UV)同时测定中药莲须中槲皮素、木犀草素、山萘酚、异槲皮甙4种有效成分。研究了缓冲溶液的离子浓度、pH值和电压对分离度和迁移时间的影响,得到了最佳分离实验条件。在
2、离子浓度为40mmol/LNa2B4O7缓冲溶液(pH9.0)中,分离电压为16kV,波长为254nm时,槲皮素、木犀草素、山萘酚、异槲皮甙4种物质在10min内得到了良好的分离测定,其检出限分别为5.0、6.7、4.5和6.0mg/L。本方法应用于实际样品的测定,结果令人满意。关键词莲须,槲皮素,木犀草素,山萘酚,异槲皮甙,毛细管电泳1引言高效毛细管电泳以高压直流电场为驱动力,以毛细管作分离通道,依据样品之间电离度和分配行为上的差异而实现分离,具有高效、快速、样品用量少等优点,与传统的高效液相色谱分析法相比,它进样[1,2]体积小(1～50μL)、用时短,而且不会污染柱。在中药
3、有效成分分析中已得到了广泛应用。莲须为睡莲科植物莲的干燥雄蕊,用于治疗遗精滑精、带下和尿频。莲须、荷叶、莲子心和莲子均为莲的不同药用部位。化学成分和含量测定方法集中在莲子上,对莲须中的有效成分分析还不多见,孟宪[3][4]生等使用高效液相色谱分析了莲须中的槲皮素和山萘酚。王月伶等采用离子液体修饰毛细管胶束电动色谱法测定了槲皮素和异槲皮甙。本实验采用毛细管电泳紫外检测同时分离测定了莲须中的槲皮素、木犀草素、异槲皮甙和山萘酚。在优化的实验条件下,上述4种组分能被完全分离测定。本实验方法简便、快速,为莲须的质量分析提供了新的指标性成分的分析方法。2实验部分2.1仪器与试剂CL1020高
4、效毛细管电泳仪(北京彩陆科学仪器有限公司、中科院研究生院应化所),检测波长范围为190～700nm;未涂层弹性石英毛细管柱(50μmi.d,总长50cm,有效长度40cm,(河北永年光导纤维厂),pHS23B酸度计(上海雷磁仪器厂),H6605型超声清洗机(无锡电子设备厂)。标准对照品:槲皮素、木犀草素、异槲皮甙、山萘酚(Sigma公司)、莲须(北京同仁堂药店),其它试剂均为分析纯。实验用水为三次蒸馏水。1.0g/L标准溶液的制备:准确称取槲皮素、木犀草素、异槲皮甙和山萘酚对照品,分别用乙醇溶解,以0.45μm醋酸纤维滤膜过滤后备用。2.2实验方法以40mmol/LNa2B407
5、(NaOH调节至pH9.0)缓冲溶液为电泳介质。未涂层弹性石英毛细管(50μmi.d,总长50cm,有效长度为40cm)。所有溶液使用前均用0.45μm滤膜过滤。毛细管使用前用0.1mol/LNaOH、水、电泳缓冲溶液各冲洗10min,然后在每次电泳后分别用0.1mol/LNaOH、水、缓冲溶液冲洗5、5和2min,可保持迁移时间和峰高良好的重现性,然后进行分离测定。采用重力进样,进样高度10cm,进样时间6s,分离电压16kV,检测波长254nm。所有实验均在室温下进行。2006209220收稿;2007203207接受本文系国家自然科学基金(No.20175025,29875
6、027)、国家自然科学基金分析化学重点基金(No.20235010)资助项目3E2mail:jrjhn1025@hist.edu.cn1188分析化学第35卷2.3样品溶液的制备莲须样品粉碎,过筛(20μm)后,准确称取4.6101g,加人50mL乙醇,水浴加热回流4h,趁热过滤,滤液蒸发至15mL,然后再稀释定容至50mL,样品溶液以0.45μm滤膜过滤后备用。3结果与讨论3.1缓冲溶液pH及其浓度的影响本方法分别以Na2B4O7溶液、Na2HPO42NaH2PO4混合溶液和Na2HPO42Na2B4O7混合溶液、NaH2PO42Na2B4O7混合溶液为缓冲溶液进行电泳分析实验
7、,结果发现,以Na2B4O7溶液作为电泳缓冲溶液分离效果最好。缓冲溶液的pH值是影响组分分离的主要因素,它可以影响Zeta电势(ζ)、电渗流(FOF)和分[5～7]析物的带电情况,进而影响分析物的迁移时间。在实验过程中得知,随着pH值的增大,迁移时间延长,但增大程度不同,上述4种物质具有不同的迁移时间和出峰顺序,如图1所示。pH对4种分析物迁移时间的影响如图2a所示。其迁移时间随pH的增大而延长。4种物质的出峰顺序也有变化。随pH值的增大4种物质之间的分离度增大,而电流也随着增大
