DNA重组技术的基本工具和基因工程的基本操作程序

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1、DNA重组技术的基本工具和基因工程的基本操作程序一.对基因工程概念的理解别名基因拼接技术或DNA重组技术操作对象操作水平基本过程结果原理二.基因工程的基本操作工具1.与DNA分子相关的酶⑴几种酶的比较项目限制酶DNA连接酶DNA聚合酶解旋酶作用底物作用部位作用特点作用结果⑵限制酶与DNA连接酶的关系2.载体⑴作用⑵具备的条件⑶种类特别提醒①一般來说，天然载体往往不能满足人类的所有要求，因此人们根据不同的目的和需要，对某些天然的载体进行人工改造。②限制酶切割位点所处的位置必须是在所需的标记基因Z外，这样才能保证标记基因的完整性，有利于对冃的基因的检测。练习:下表中列出了儿种限制酶识别序列及其切割

2、位点，图1＞图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：限制酶BarriHIHindi]]EcoRISmaI识别序列及切割位点G1GATCCCCTAGtGA1AGCTTTTCGAtAG丨AATTCCTTAAtGCCCIGGGGGGtCCCEeoRI冃的EcoRI+「W丄+—MN；；；；：；；；；；；；；；；；外i»DNA鼻■……y…$HamWISma,I///ndIII1)一个图1所示的质粒分子经SmaI切制前后，分别含何个游离的磷酸基团。⑵若对图中质粒进行改造，插入的SmaI酶切位点越多，质粒的热稳定性越o⑶用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用SmaI切割，原因是(4)与只

3、使用EcoRI相比较,使用BamHI和Hindlll两种限制酶同时处理质粒、夕卜源DNA的优点在于可以防止0(5)为了获取重组质粒，将切割后的质粒与冃的基因片段混合，并加入酶。(6)重组质粒屮抗生素抗性基因的作用是为了o三.基因工程操作程序1.基因工程的操作程序分析⑴1=1的基因的获取途径PCR技术与DNA复制的比较PCR技术DNA复制相同占八、、原理原料不同点解旋方式场所结果⑵基因表达载体的构建(核心)a.基因表达载休的纽成：等。b.基因表达载体的构建方法-—同一种限制酶切割―带有黏性带有相尙黏性末末端切口端的目的基因片段II[dza连接酶雨组DZA（环状3fi组质粒）■■•■■■■■■■■

4、■■■■特别提醒①插入的冃的基因的表达需要调控序列，插入基因部位Z前需有启动子，Z后需有终止子。②切割质粒和日的基因的限制酶必须是同一种酶，以获得相同的黏性末端，利于基因表达载体的构建。（3）将冃的棊因导入受体细胞（转化）生物种类植物细胞动物细胞微牛物细胞常用方法受体细胞转化过程（4）目的基因的检测与鉴定类型检测内容方法结果显示分了检测导入检测转录检测翻译检测个体水平检测特别提醒:在整个丁程屮，只存第三步将日的基因导入受体细胞过程屮不发生碱基互补配对，其他步骤均发生配对。对应训练1•下列关于基因工程的叙述，错误的是（）A.F1的基因和受体细胞均可来口动物、植物或微生物B.限制性核酸内切酶和DN

5、A连接酶是两类常用的工具酶C.人胰岛索原基因在人肠杆菌中表达的胰岛索原无牛物活性D.载体上的抗性基因有利于筛选含重组DNA的细胞和促进冃的基因的表达1.下列冇关基因工程中限制性核酸内切酶的描述，错误的是（）。A.-种限制性核酸内切酶只能识别一-种特定的脱氧核卄酸序列B.限制性核酸内切酚的活性受温度影响C.限制性核酸内切酶能识别和切割RNAD.限制性核酸内切酚可从原核生物中提取2.如图是利用棊因工程技术培育转棊因栢物，生产可食用疫苗的部分过程示意图，其中PstI、SmaI、EcoRI、ApaI为四种限制性核酸内切酶。下列说法错误的是()。A.图示过程是基因工程的核心步骤B.表达载体构建时需要用到

6、限制酶SmaIC.抗卡那霉素棊因的存在冇利于将含冇抗原基因的细胞筛选出來D.除图示组成外，表达载体屮还应该含有启动了和终止了等结构1.下图是获取转基因抗冻番茄植株的过程示意图，有关叙述正确的是()A.过程①获取的目的基因，可用于基因工程和比目鱼基因组测序B.将多个抗冻基因编码区依次相连成能表达的新基因，不能得到抗冻性增强的抗冻蛋白C.过程②构成的重纽质粒缺乏标记基因，需要转入农杆菌才能进行筛选D.应用DNA探针技术，町以检测转基因抗冻番茄植株中冃的基因的存在及其完全表达2.科学家将动物体内的能够合成胰岛索的基因与大肠杆菌的DNA分了重组，并fl.在大肠杆菌体内表达成功。请根据图回答问题：⑴此图

7、表示的是采取合成基因的方法获取基因的过程。⑵图中①DNA是以为模板，形成单链DNA,在酶的作用下合成双链DNA,从而获得了所需要的基因。⑶图中③代表DNA,含基因。⑷图屮④表7]