重组技术的基本工具和基本操作程序.ppt

《重组技术的基本工具和基本操作程序.ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、专题一　基因工程基因工程是指按照人们的意愿，进行严格的设计，并通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，因此又叫做DNA重组技术。（P1）抗虫棉普通棉基因工程的别名操作环境操作对象操作水平基本过程原理结果基因拼接技术或DNA重组技术生物体外基因DNA分子水平人类需要的基因产物剪切→拼接→导入→表达基因重组基因工程的概念一、DNA重组技术的基本工具“分子手术刀”──“分子缝合针”──“分子运输车”──限制酶DNA连接酶基因进入受体细胞的载体（

2、一）限制性核酸内切酶——“分子手术刀”1.分布：2.特点：专一性，即能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且切割每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键，使之断开。主要从原核生物中分离纯化出来的一类酶。GAATTCCTTAAGGCTTAAGAATTCCCCGGGGGGCCCCCCGGGGGGCCC︰︰︰︰︰中轴线︰︰︰︰↓↑EcoRⅠ（在G与A之间切割）SmaⅠ（在G与C之间切割）粘性末端平末端↓↑在识别序列中轴线两侧切割，产生粘性末端；在识别序列中轴线处切割，产生平末端。3.结果：思考要想获得某个特定性状的基因必须要用限制酶切几个切口？可

3、产生几个黏性末端？两个切口，四个黏性末端。GCTTAAAATTCGGCTTAAAATTCG（二）DNA连接酶——“分子缝合针”GCTTAAAATTCG（二）DNA连接酶——“分子缝合针”2.连接酶的部位：磷酸二酯键，不是氢键GCTTAAAATTCG磷酸二酯键磷酸二酯键1.连接酶的作用：将互补配对的两个黏性末端连接起来，使之成为一个完整的DNA分子（二）DNA连接酶——“分子缝合针”3.连接酶的类型（按来源分类）(1)E.coliDNA连接酶：(来源于大肠杆菌)只能连接双链DNA片段互补的粘性末端(2)T4DNA连接酶：（来源于T4噬菌体）既可以连接双链D

4、NA片段互补的粘性末端，又可以“缝合”双链DNA片段的平末端,但连接平末端之间的效率比较低。DNA聚合酶和DNA连接酶有何相同点和不同点？DNA连接酶DNA聚合酶连接DNA链数连接部位相同点双链单链在两DNA片段之间形成磷酸二酯键将单个核苷酸加到已存在的核酸片段上，形成磷酸二酯键都能形成磷酸二酯键（三）基因进入受体细胞的载体——“分子运输车”1.作用：2.条件：能在宿主细胞内复制并稳定地保存；具有多个限制酶切位点,便于目的基因插入；具有标记基因，便于筛选；必需是安全的，对宿主细胞无害。将外源基因送入受体细胞3.种类：质粒、λ噬菌体的衍生物、动植物病毒等质

5、粒细菌拟核DNA之外能自主复制的小型双链环状DNA分子在进行基因工程操作中，真正被用作载体的质粒，都是在天然质粒的基础上进行过人工改造的。二、基因工程的基本操作程序目的基因的获取基因表达载体的构建将目的基因导入受体细胞目的基因的检测与鉴定第一步第二步第三步第四步（一）目的基因的获取1、目的基因主要是指________________，也可以是一些具有调控作用的因子。编码蛋白质的基因2、获取目的基因的常用方法有哪些?（1）从基因文库中获取目的基因（2）利用PCR技术扩增目的基因（3）人工合成目的基因原核细胞的基因结构原核细胞基因编码区（编码序列）：能指导有

6、关蛋白质的合成，即能够编码蛋白质非编码区（调控序列）：位于编码区上游和编码区下游的DNA序列，虽不能指导有关蛋白质的合成，但有调控遗传信息表达的核苷酸序列，如启动子、终止子等真核细胞的基因结构真核细胞基因编码区（间隔、不连续）外显子：能编码蛋白质的DNA序列内含子：不能编码蛋白质的DNA序列非编码区：与原核生物具有相似功能的启动子、终止子基因文库的构建基因组文库的构建提取某生物全部DNA用适当限制酶切割许多DNA片段与载体连接导入受体菌群该生物基因组文库（每个受体菌含有一段不同的DNA片段）cDNA文库的构建——mRNA反转录形成mRNA逆转录酶杂交双链

7、核酸酶H单链DNADNA聚合酶双链DNA与载体连接导入受体菌群该生物cDNA文库1.下列关于基因工程中限制酶的描述，错误的是（ ）A.一种限制酶只能识别一种特定的脱氧核苷酸序列B.限制酶的活性受温度的影响C.限制酶能识别和切割RNAD.限制酶可从原核生物中提取C2.不属于质粒被选为基因运载体的理由是（）A、能复制　　　B、有多个限制酶切点C、具有标记基因　D、它是环状DNAD3、下列关于限制酶的说法正确的是（）A、限制酶广泛存在于各种生物中，但微生物中很少B、一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列C、不同的限制酶切割DNA后都会形成黏性末端D、限

8、制酶的作用部位是特定核苷酸形成的氢键B4.下图为DNA分子结构示意图，对该图的正