实验1DNS法测定总糖

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1、实验1.DNS法测定总糖含量目的要求’掌握总穂的测定原理，学习用比色法测定总糖的方法。实验原理：在？＜aOH和丙三醇存在下，3,5—二硝基水杨酸（DNS）与还原穂共热后被还原生成氨基化合物。在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色，在540nm波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含穂+还原糖(DNS)HOOC〔3—氨•臬一5—硝月；水杨酸）黄色桔红色试剂和器材=—、试剂1.3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂：称取6.5gDNS溶于少量热蒸餐水中，溶解后移入1000ml容量瓶中，加入2molT氢氧化钠潘液325m

2、l，再加入45g丙三醇，摇匀，冷却后定容至lOOOmloZ葡萄糖标准溶液：准确称取干燥恒重的葡萄糖200mg，加少量蒸溜水溶解后，以蒸徭水定容至100ml,即含■葡萄穂为2.0mg'mlD3.6mol,LHC1：取125ml浓HC1（35%〜38%）用蒸谓水稀释到250ml.斗一碘一碘化钾溶液：称取羽碘，10g碘化钾溶于100ml蒸餐水中。5.6mol/LNaOH：称取60gNaOH溶于250ml蒸驚水中。6.0.1%酚酎指示剂（用95%乙醇配制）。二、材料小麦淀粉或玉米淀粉。三、器材721型分光光度计，天平，水浴锅，电炉，试管若干等。操作方法’30.640.8510.

3、40.201.21.62葡萄轄标准區制作取6支15mmxl50mm试管，按下表加入2.0mgml葡萄糖标准液和蒸驚水。管号葡萄糖标准液•ml蒸醫水ml葡萄糖含壘mgOD001010.20.S0.420.40.60.8在上述试管中分别加入DNS试剂2.0ml,于沸水浴中加热2min进行显色，取出后用流动水迅速冷却，各加入蒸筒水9.0tnl，揺匀，在540nm波长处测定光吸收值。以1.0ml蒸谄水代替葡萄糖标准液按同样显色操作为空白调零点。以葡萄糖含量(mg)为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制标准曲线。二、样品总穂的水解及提取准确称取0.5g小麦淀粉，敗在锥形瓶中，加入6mo

4、l‘，LHC110ml,蒸韶水15ml,在沸水浴中加热0.5h，豉出1〜2滴置于白瓷板上，加1滴I-KI溶液检查水解是否完全。如已水解完全，则不呈现蓝色。水解毕，冷却至室温后加入1滴酚酎指示剂，以6mol-LNaOH液中和至溶液呈徽红色，并定容到100ml,过滤取滤液10ml于100ml容量瓶中，定容至刻度,混匀，即为稀释1000倍的总糖水解液，用于总糖测定°三、样品中含穗臺的测定取3支15mmxl50nKn试管，分别按下表加入试剂：项目空白总糖HnO/ml100样品溶液，ml0113,5■二硝基水杨酸试剂/mlOD值/540nm222加完试剂后，于沸水浴中加热hnir

5、i进行显色，取出后用流动水迅速冷却，各加入蒸谓水9.0ml,揺匀，在540nm波长处测定光吸收值□测定后，取样品的光吸收平均值在标准曲线上查出相应的糖量。五、结果处理按下式计算出样品中总糖的百分含量：总糖(以葡萄糖计)%=第爲X稀解倍數X0.9X100式中：C——总糖提取液的浓度，mgtnl；V一一总糖提取液的总体积，ml?CXV=Nfxm—样品重量，g;1000mg换算成g的系数。注意事项：标准鞍制作与样品含糖壘测定应同时进行，一起显色和比色思考题=比色时为什么要设计空白管？