基于抑制PI3K-Akt-NF-κB信号通路的黄连碱改善LPS诱导急性肺损伤的研究

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1、分类号：R453.9单位代码：10159密级：公开学号：201520658硕士学位论文中文题目：基于抑制PI3K/Akt/NF-κB信号通路的黄连碱改善LPS诱导急性肺损伤的研究英文题目：CoptisineamelioratesLPS-inducedacutelunginjurythroughitsanti-inflammatoryactivitybyinhibitionofthePI3K/Akt/NF-κBpathway论文作者：洪凌指导教师：裴凌教授学科专业：麻醉学完成时间：2018年2月中国医科大学硕士学位论文基于抑制PI3K/Akt//NF-κB信号通路的黄连碱改善L

2、PS诱导急性肺损伤的研究CoptisineamelioratesLPS-inducedacutelunginjurythroughitsanti-inflammatoryactivitybyinhibitionofthePI3K/Akt//NF-κBpathway论文作者洪凌指导教师裴凌教授申请学位医学硕士培养单位中国医科大学第一附属医院一级学科临床医学二级学科麻醉学研究方向内毒素血症的器官保护论文起止时间2016年5月—2018年2月论文完成时间2018年2月中国医科大学（辽宁）2018年2月I中国医科大学硕士学位论文摘要目的：利用脂多糖（LPS）诱导小鼠急性肺损伤（ALI

3、）模型，探讨黄连碱（Coptosine）对小鼠肺损伤的保护作用及其作用机制，以期为临床应用提供理论依据。方法：1、致死剂量LPS滴鼻诱导小鼠急性肺损伤生存率的实验模型：采用经鼻气管内滴注LPS的方式造模，小鼠麻醉后，将400μgLPS溶解于50μl的无菌磷酸盐缓冲液（PBS）中，经鼻气管内滴注诱导ALI模型。2、LPS滴鼻诱导小鼠急性肺损伤的实验模型：采用经鼻气管内滴注LPS的方式造模，小鼠麻醉后，将25μgLPS溶解于50μl的无菌PBS中，经鼻气管内滴注诱导ALI模型。3、上述两种模型的实验均采用相同的实验分组及给药方式，实验分为四组，（1）对照组（CON组），小鼠只经鼻

4、气管内滴注50μl无菌PBS溶液；（2）LPS模型组（LPS组），小鼠只接受LPS滴鼻处置；（3）黄连碱高剂量预处理组（LPS+高剂量黄连碱）；（4）黄连碱低剂量预处理组（LPS+低剂量黄连碱）；在LPS滴鼻诱导急性肺损伤前，分别灌服20mg/kg及10mg/kg黄连碱，连续给药7天，对照组及LPS模型组连续7天分别灌服相同体积的灭菌水。4、建立急性肺损伤模型12h后，取肺组织，称量小鼠肺组织的重量，计算肺湿干重比；检测肺组织中的髓过氧化物酶（MPO）活性；采用苏木精-伊红（H&E）染色法，进行肺组织染色，检测小鼠的肺组织病理变化。5、采用BCA法测定支气管肺泡灌洗液（BAL

5、F）中的蛋白浓度；计数BALF中总细胞数后，采用瑞-姬氏染色后，在高倍镜下对中性粒细胞数、白细胞数分类计数；采用酶联免疫吸附法（ELISA法）测定BALF中细胞因子（TNF-α、IL-6、IL-1β）的水平。6、采用蛋白印迹法（WesternBlotting）检测各组小鼠肺组织中NF-κBp-p65、NF-κBp65、p-PI3k、PI3k、p-Akt、Akt的蛋白表达水平。结果：1、黄连碱预处理对致死剂量的LPS诱导的小鼠急性肺损伤的生存率的影响LPS攻击4小时后，小鼠表现出嗜睡、竖毛、腹泻、挤压，伴有明显的内毒素休克迹象。LPS滴注后108小时，对照组、LPS模型组、黄连

6、碱高剂量预处理组及黄连III中国医科大学硕士学位论文碱低剂量预处理组的死亡率分别为0％，100％，50％和70％。黄连碱高剂量(20mg/kg)预处理组的死亡率显著低于LPS模型组（P<0.05）。结果表明，黄连碱高剂量预处理组可降低致死剂量LPS诱导的小鼠急性肺损伤的死亡率，提高其生存率。2、黄连碱预处理对LPS诱导的小鼠急性肺损伤的肺组织湿干重比（W/D）的影响LPS模型组肺组织湿干重比显著高于对照组（P<0.01）。与LPS模型组相比，黄连碱高剂量预处理组及黄连碱低剂量预处理组显著降低肺脏的湿干重比（P<0.01，P<0.05）。3、黄连碱预处理对LPS诱导的小鼠急性肺

7、损伤肺组织中MPO活性的影响LPS模型组小鼠的MPO水平显著高于对照组（P<0.01）。与LPS模型组相比，黄连碱高剂量预处理组及黄连碱低剂量预处理组显著降低肺组织中MPO水平（P<0.01，P<0.05）。4、黄连碱预处理对LPS诱导的小鼠急性肺损伤病理的影响对照组小鼠的肺组织具有完整的肺泡结构，无明显的炎性细胞浸润，且肺泡壁未见增厚现象。LPS模型组小鼠肺组织中观察到肺泡内出现充血，出血及水肿，且可见明显增厚的肺泡壁、断裂的肺泡壁甚至发生萎陷，大量炎性细胞在肺组织间质中凝集。黄连碱高剂量预处理组及黄