阻断e-选择素缓解lps诱导的急性肺损伤

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1、第二军医大学博士学位论文阻断E--选择素缓解LPS诱导的急性肺损伤姓名：郭桅申请学位级别：博士专业：药理学指导教师：苏定冯201205E选择素与急性肺损伤中文摘要E．选择素是表达在内皮细胞表面的一种重要的粘附分子。在组织受到损伤或有炎症反应时，它的表达上调。升高的E．选择素水平对血流中的白细胞有强烈的吸引作用，聚集到损伤或炎症部位的白细胞释放各种氧自由基以及炎症因子，对入侵的病原体起到了很好的杀伤作用。但是异常表达的E．选择素以及过度聚集和激活的白细胞往往也会对正常组织产生严重损伤。比如由LPS引起的急性肺损伤的发病就涉及这个过程。在本工作中我们提出假说——如果可以阻断

2、E一选择素这种重要的免疫粘附分子，可以对急性肺损伤起到显著的保护作用。我们使用LPS作为炎症刺激剂在小鼠上复制急性肺损伤的模型，实验对象是E．选择素基因敲出鼠以及野生型对照小鼠。E．选择素基因敲出小鼠在造模后的状态明显好于野生型对照组。12小时后，用红外照相机记录各组小鼠的皮肤表面温度。随后，取小鼠血样，肺组织样本，肺泡灌洗液等样本做进一步检测：E．选择素和髓过氧化物酶(MP0)蛋白在肺组织中的表达，肺组织丙二醛(MDA)含量，血清炎症因子水平，肺组织干湿比(wet／dry)，病理学染色等等。结果发现LPS造模后，E一选择素基冈敲出小鼠的血清炎症因子TNF．旺、IL．1

3、p明显低于野生型对照小鼠，肺泡灌洗液里的白细胞聚集也明显较少，MPO蛋白的表达更少，MDA含量更低，体温更接近正常。另外生存率实验表明，LPS作用后的E一选择素基因敲出小鼠的生存率明显优于野生型小鼠的造模对照。随后我们希望可以通过体外筛选可以找到有效的E．选择素抑制剂。LPS刺激人脐静脉内皮细胞(HUVEC)可以明显上调E．选择素的表达，但是100uM的西咪替丁在不影响细胞活力的情况下，对E选择素的表达有显著的抑制作用。进一步的实验发现，小鼠口服西咪替丁(200mg／l(g)，可以明显改善LPS绣导的急性肺损伤。在造模后的12小时，红外成像系统表明小鼠的体温更接近J下常

4、，肺水肿(干湿比)指数明显低于模型对照组，血清炎症因子TNF．Q更低，生存率也明显延长。我们得出结论：阻断E选择素可以缓解LPS诱导的急性肺损伤，西咪替丁的保护作用很可能与它抑制E．选择素的效应有关。第二军医大学博士学位论文关键词：E．选择素，急性肺损伤，西咪替丁，炎症因子，体温，髓过氧化物酶，肺泡灌洗液E选择素与急性肺损伤AbStraCtE—selectinisanimporlantcelladhesionmoleculeexpressedonlyonendothelialceUs，andplaysaIlimponantroleinrecmitingleukocyte

5、sduringacuteinn猢ato巧lunginju阱Here，wetestedthehypothesisthatblockingE-selectincouldprotectagainsttheacutelunginjury(ALI)．E—selectindeficientandthewidetypecontrolmiceweretreatedwithLPStoinduceALI．TWelVehourslate，thebodytemperaturewaSmeaSuredwithathennalimagingc锄era．Thelungtissues，bloods锄pl

6、es，andbronchoalVeolarlavagefluid(BALF)sampIeswerecollectedforthefollowingmeaSures：expressionofE—selectinaJldmyeloperoxidaSe(MPO)，malondialdehyde(MDA)contents，、ve抛rylungweightratio，andhist0109icalexaminations．RepresentatiVe，proinflammato叮c”okinesweremeaSuredinthesen蛐．LPSchallengeincreaSed

7、geneexpressionofcelladhesionmolecules，especiallyE-selectin．Comparedwiththewild—typecontrol，E—selectindeficientmicehadsignmcantlylowersemmTNF—c【leVel，fewerwhitebloodcellsintheBALF，andlowerMDAcontentandMPOexpressionin1ungtissues．Inaseparatesetof砌’，f办切experiments，cimetidine(