miR-153靶向抑制SRC对非小细胞肺癌A549细胞生物学行为的作用及机制研究

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1、分类号：R655单位代码：10159密级：公开学号：201510182博士学位论文中文题目：miR-153靶向抑制SRC对非小细胞肺癌A549细胞生物学行为的作用及机制研究英文题目：StudyoftheeffectsonbiologicalbehaviorofmiR-153innon-smallcelllungcancerA549cellbytargetingSRCanditsmechanisms论文作者：张松指导教师：张其刚教授学科专业：外科学完成时间：2018年11月中国医科大学博士学位论文miR-153靶向抑制SRC对非小细胞肺癌A549

2、细胞生物学行为的作用及机制研究StudyoftheeffectsonbiologicalbehaviorofmiR-153innon-smallcelllungcancerA549cellbytargetingSRCanditsmechanisms论文作者张松指导教师张其刚教授申请学位医学博士培养单位中国医科大学附属第一医院一级学科临床医学二级学科外科学研究方向胸外科学论文起止时间2017年9月—2018年11月论文完成时间2018年11月中国医科大学（辽宁）2018年11月中国医科大学学位论文独创性声明本人郑重声明：本论文是我个人在导师指导下

3、独立进行的研究工作及取得的研究成果，论文中除加以标注的内容外，不包含其他人或机构已经发表或撰写过的研究成果，也不包含本人为获得其他学位而使用过的成果。对本研究提供贡献的其他个人和集体均已在文中进行了明确的说明并表示谢意。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。论文作者签名：日期：2018年11月1日中国医科大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的原件、复印件和电子版，允许学位论文被查阅和借阅。本人授权中国医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数

4、据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编学位论文。保密（），在年后解密适用本授权书。（保密：请在括号内划“√”）论文作者签名：指导教师签名：日期：2018年11月1日日期：2018年11月1日中国医科大学博士学位论文摘要目的：肺癌是最常见的恶性肿瘤，占据癌症死亡率的25.3%，其五年生存率仅为18.6%。因此，深入研究肺癌的发生发展机制，寻求有效的治疗靶点具有重要意义。SRC作为最早被发现的癌基因之一，参与细胞增殖、黏附、迁移、凋亡以及恶性肿瘤细胞浸润、转移等过程，与肿瘤的发生发展密切相关。然而，目前以SRC抑制剂单独行抗肿瘤

5、治疗的效果并不乐观。考虑到SRC在肿瘤侵袭的过程中更为重要，目前的SRC抑制剂主要抑制肿瘤播散而非肿瘤的生长。因此，我们提出疑问：将SRC与其他抗肿瘤治疗靶点联合是否会起到协同作用呢？MicroRNAs(miRNAs)是一类由18-25个核苷酸组成的保守的非编码小RNA，是非编码RNA家族的重要成。研究表明，miRNAs的异常表达普遍存在于恶性肿瘤之中，且miRNAs的表达水平与肿瘤的分期分型、预后均密切相关。因此，miRNAs己成为肿瘤发生发展、判断预后的重要标志，并成为肿瘤靶向治疗的研究热点。本研究拟通过探索miR-153在肺癌增殖、凋亡、

6、迁移、侵袭中的作用及机制，完善miR-153的网络通路，探讨miR-153能否成为抗肺癌治疗的作用靶点或联合靶点。研究方法：1、利用Targetscan、microRNA.org、mirDIP、miRcode、DIANA等生物信息学网站预测miR-153可能的作用靶点；利用基于TCGA的LinkedOmics数据库验证miR-153与靶基因SRC的表达相关性；利用Ualcan数据库检索SRC在肺腺癌或肺鳞癌中的表达；利用Kaplan-MeierPlotter数据库检索SRC对非小细胞肺癌患者总体生存率的影响。2、通过构建SRC3’UTR野生型和

7、突变型载体，在工具细胞293T中分别与miR-153mimic或mimiccontrol共转染，行双荧光素酶报告基因实验，验证miR-153对靶基因SRC的调控。3、转染miR-153mimic和miR-153inhibitor，构建miR-153过表达、miR-153抑制的A549细胞，通过qRT-PCR确认转染结果；并转染SRCsiRNA，构建SRC沉默的A549细胞，通过Westernblot检测miR-153mimic、inhibitor和SRCsiRNA对SRC表达的影响。4、通过平板克隆实验验证miR-153和SRC对细胞克隆能力的

8、影响。5、通过CCK8实验验证miR-153和SRC对细胞增殖活力的影响。6、通过EdU实验验证miR-153和SRC在DNA合成层面对细胞增殖的影响