miRNA-122在猪DCD供肝质量评估中的作用研究

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1、分类号：R617单位代码：10159密级：公开学号：201110151博士学位论文中文题目：miRNA-122在猪DCD供肝质量评估中的作用研究英文题目：TheresearchofmiRNA-122intheevaluationofthequalityofDCDliverinpigs论文作者：王光指导教师：刘永锋教授学科专业：外科学完成时间：2018年10月I中国医科大学博士学位论文miRNA-122在猪DCD供肝质量评估中的作用研究TheresearchofmiRNA-122intheevaluationofthequalityofDCDliverinpigs论文作者王光指导教师刘永锋

2、教授申请学位医学博士培养单位第一临床学院一级学科临床医学二级学科外科学研究方向器官移植、外科学论文起止时间2011年3月—2018年10月论文完成时间2018年10月中国医科大学（辽宁）2018年10月IIIII中国医科大学博士学位论文摘要前言肝脏移植是治疗终末期肝病最有效的手段，但供肝来源短缺与等待肝脏移植患者数量之间的矛盾仍是目前全球器官移植面对的难题，国外20世纪60年代开始利用心脏循环死亡后器官捐献（DonationafterCardio-circulatoryDeath，DCD）供体，之后被脑死亡后器官捐献（DonationafterBrainDeath，DBD）供体所取代，直

3、到20世纪80年代，欧美移植中心重新关注DCD供体。与DBD供体相比，DCD供肝术后发生移植物原发性无功能(primarynon-function，PNF)、肝动脉血栓形成(hepaticarterythrombosis，HAT)等严重并发症机会明显增加，这与在心脏停跳过程中发生复杂缺血、缺氧条件所导致的热损伤明显相关。因此对于DCD供肝的质量评估显的尤为重要，以避免放弃可用供肝造成的器官浪费，以及应用不适合供肝造成严重不良后果。目前对DCD供肝质量评估方式主要有冷-热缺血时间、脂肪肝程度、供者血钠水平、年龄、肝炎感染、肿瘤等方面，仍没有一种客观反映供肝损伤程度及预测预后的指标，因此，寻

4、找一种敏感、客观的评估指标是目前DCD肝脏移植面临的一个严峻问题。miRNA-122是miRNA家族的一员，约占肝脏细胞中总miRNA的70%，且在其他组织中检测不到，胚胎时期，肝脏细胞中miRNA-122水平开始升高，在成年鼠肝脏中，每个细胞中含量可达到66000拷贝，人的肝细胞中可达到135000拷贝，miRNA-122序列从人到斑马鱼都是高度保守的，而且斑马鱼的原位杂交也说明miRNA-122肝脏特异性也是高度保守的。miRNA-122参与肝脏的发育分化、基因表达调控和功能代谢，研究表明其与非酒精性脂肪性肝病、病毒性肝炎、肝细胞癌、药物性肝损伤均有明显相关性，近年来随着对miRNA

5、-122研究的深入，在肝移植方面，Verhoeven等的研究报告显示，DCD供肝低温机械灌注期间，灌注液中miRNA-122水平对供肝缺血损伤有一定评估作用，也有实验表明，术后受者血清中miRNA-122水平可早期预测术后急性排斥反应及缺血性胆道并发症，但在DCD供肝获取过程中，供肝组织中miRNA-122水平与供肝损伤程度及对移植后肝脏功IV中国医科大学博士学位论文能恢复预测方面的研究鲜有报道。目的：本实验通过建立猪DCD肝脏移植模型，研究DCD供肝组织中miRNA-122表达水平变化与供肝损伤程度及术后肝功能恢复情况的相关性，同时进一步建立合并低氧血症的DCD肝脏移植模型，研究热缺血

6、合并缺氧对供肝损伤的影响，以及供肝组织中miRNA-122表达水平对热缺血合并缺氧所致供肝损伤的评估作用，为DCD供肝损伤评估提供新的监测指标及对以后供肝保护提供新的干预靶点。方法：1、通过“窒息”方法模拟临床MaastrichtIII型DCD肝移植过程，建立猪DCD肝脏移植模型，在不同热缺血时间点（缺血0分钟、10分钟、20分钟、30分钟）留取新鲜肝脏组织及病理制片所需肝脏组织。2、建立合并低氧血症的猪DCD肝脏移植模型，在不同缺氧处理时间点（缺氧15分钟、30分钟、60分钟）及缺氧合并热缺血时间点（缺氧15分钟、30分钟、60分钟合并热缺血20分钟）留取新鲜肝脏组织及病理制片所需肝脏

7、组织。3、提取肝脏组织中总miRNA，采用qRT-PCR方法测定不同时间点肝脏组织中miRNA-122表达水平，监测肝脏移植后不同时间点（移植术后1小时、3小时、6小时、12小时、24小时）血清酶学变化及总胆汁量情况。4、以多样本方差分析方法比较各监测指标随肝脏缺氧及热缺血时间变化有无统计学差异，以柱状图表示各监测指标随时间变化趋势。结果：1、在猪DCD肝移植模型中，热缺血10分钟时，供肝组织病理学并没有明显改变，但供肝组织中miR