《仪器分析》实验报告-液相色谱

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1、《仪器分析》实验报告学号：2008011872实验二:姓名：wn同组成员：张圆满李虹禹陈天驰韩翔a-VE在反相HPLC上的定量分析实验日期：2011/10/271【实验目的】(1)熟悉高效液相色谱仪的分离原理及操作方法。(2)学习反相HPLC分离条件的选择及定性和定量方法。(3)了解紫外检测器的原理、应用以及最佳波长选择的重要性。2【实验原理】2.1高效液相色谱的特点采用高压泵输送流动相，梯度洗脱，可在柱后直接检测流出液成分，通过改变溶剂极性或强度进而改变色谱柱效能，分离选择性和组分的容量因子，实现改善色谱系统分离度的目的。2・2高效液相色谱仪图1高效液相色谱仪1.高压输液系统是提供足够恒定的

2、高压，使流动相以稳定的流量快速渗透通过固定相。2-进样系统一般采用旋转式六通阀在高压下进样。2.分离系统在液相色谱柱中完成。3.检测系统液相色谱常见检测器有：紫外光度检测器，示差折光检测崙.荧光检测崙电化学检测器。1.3高效液相色谱的类型根据固定相和分离机理的不同，高效液相色谱如下几种类型1•液一固吸附色谱：基于各组分在固体吸附剂表面上具有不同吸附能力而进行分离。2•液一液分配色谱：组分在两相间经过反复多次分配各组分间产生差速迁移，从而实现分离。3•化学键合相色谱：通过共价键将有机固定液结合到硅胶载体表面得到各种性能的固定相。4.离子交换色谱：离子交换树脂上可电离的离子与流动相中带相同电荷的组

3、分离子进行可逆交换，由于亲和力的不同彼此分离。5•离子色谱：用离交换树酯作为固定相，电解质溶液为流动相，用电导检测器检测。6•凝胶色谱：基于试样中各组分分子的大小和形状不同来实现分离。2.4高效液相色谱在本实验中的应用原理反向色谱与正相色谱组成相反，是以非极性或弱极性的固定液制成的固定相，以极性或相对强的极性溶剂作为流动相组成的液一液分配色谱。但目前多是采用化学反应的方法将非极性或弱极性的有机物分子键合到载体表面，制成键合相的固定相，所以也称键合相色谱。这种色谱的分离机理比较复杂，一般认为是液一固吸附和液一液分配并存。在反向HPLC中常用的键合相有十八烷基硅烷（C18）.辛基硅烷（C8）氟基硅

4、烷、氨基硅烷等。常用的溶剂有甲醇，乙睛.水等。有时需要加入某种修饰剂以获得良好的分离。例如利用反相键合相色谱分离弱酸时为了抑制它的解离，须在乙睛/水或甲醇/水流动相中加入少量的乙酸。—般反相键合相色谱适用于分离极性较弱的样品，a-VE在其多种异构体中极性是最弱的一种，在C18柱上有较强的保留，最后流出色谱柱。（5-VE极性较强，最先流出色谱柱。a-VE在220nm和292nm处有两个明显的紫外吸收峰，本实验选择292nm作为定量分析的检测波长，以排除其他物质的干扰，确保定量准确。3【实验仪器与试剂】仪器：高效液相色谱仪、紫外检测器、流动相脱气装置。试剂：无水乙醇：分析纯甲酸：色谱纯水：重蒸去离

5、子水a-VE标样溶液：准确称量a-VE标样，用无水乙醇配制，浓度约1000mg/L混合VE溶液：准确称量混合VE样品，用无水乙醇溶解并定溶至250mL容量瓶中。4【实验内容及步骤】(1)按照“仪器操作说明”开机。(2)设置色谱仪参数：色谱柱为C】8,流动相为甲醇/水(体积比为100/0),流速为1.OmL/min,柱温300C,紫外检测波长为292nm,进样量为20“Lo(3)检杳流路确无气泡后，启动色谱系统，等待基线稳定。(1)注入VE混合样品，待样品中所有色谱峰流出后结束分析。(5)将流动相配比变为甲酹/水为97/3(体积比)重复(4)的操作，比较分离情况。(6)注入a~VE标样，用保留时

6、间确认VE混合样品中a_VE峰位。(7)改变检测波长为254nm,重复(4)的操作，比较检测结果。(8)调整到最佳色谱条件(包括流动相.检测波长.流速.柱温等)，等待基线稳定。(9)稀释a-VE标样，使浓度与VE混合物中a-VE的浓度相匹配(峰面积值相近)。(10)注入稀释后的a-VE标样，重复三次(国积误差小于3%),取平均值。(11)注入混合VE样品，重复三次，(峰面积误差小于3%)取平均值。(12)按“仪器操作说明”关机。5【数据记录与处理】2.1数据记录向液相色谱仪中分别注入20ML的a-VE标样、混合样和未知样,得到各谱图VE峰数据，截图如下：图2a-VE标准样品图谱VjmrMtI(

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