高效液相色谱-仪器分析实验教案.doc

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1、仪器分析实验课程教案实验名称：高效液相色谱混合物的定量和定性测定实验类型验证性教学时数7每组人数8一、实验目的及要求：1．掌握高效液相色谱定性和定量分析的原理及方法；2．了解高效液相色谱的构造、原理；3．学习高效液相色谱仪的操作。教学重点：1、溶液配制的条件2、色谱工作站参数的设定。3、定量定性分析方法教学难点：(1)、学习高效液相色谱的使用方法、了解该仪器的结构；(2)、定量定性分析方法二、实验原理高效液相色谱由储液器，泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成，储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱内，由于样品

2、溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动，经过反复多次的吸附—解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪。三、主要仪器和试剂主要仪器：安捷伦1260液相色谱仪，配有紫外检测器，PhenomenexODS柱]；1自动进样器。试剂：色谱纯甲苯、苯、丙酮、甲醇、超纯水；未知样品1、2、3、4。教学内容及过程（一）检查实验预习报告（二）上次实验存在的问题（三）高效液相色谱操作（四）实验内容及步骤A、溶液配制1配制标准系列溶液三组分混标液：每mL溶液分别含5uL苯

3、、甲苯和丙酮。分别准确移取0、2.50、5.00、10.00和20.00uL甲苯容易溶于1.00mL甲醇中。2流动相的配制、过滤和除气。标准苯测试液。未知样品1号、2号、3号和4号。B、上机测定1更换流动相。2按操作规定开动仪器，排气后让色谱柱平衡（流动性为80%甲醇，速度1.0mL/min）。3设置色谱工作站参数。AgilentHPLC仪色谱柱：流动相：甲醇：水=8：2流速：1.0mL/min检测波长：254nm进样体积：10μL4进样、采集色谱图。1）三组分混标液2）标准溶液系列3）未知样品5色谱数据分析，打印色谱图及分析报告。6更换甲醇流动相，清洗色谱柱

4、。7关闭仪器。（五）提问1、高效液相色谱溶液配制需要注意哪些操作？答：药品需要色谱纯的；配制好的溶液需要抽气处理——这步操作有些高效液相色谱能自动完成。2、利用高效液相色谱进行定量和定性分析的依据有哪些？答：定性分析根据相同色谱系统下同一物质的保留时间相同；定量分析的依据是在一定浓度范围内，浓度与峰面积(或峰高)成正比。（六）数据记录与结果处理确定样品内的物质，确定样品中甲苯的浓度。1）定性分析实验记录 2）定量分析实验记录丙酮浓度（ul/mL）峰面积（uV*s）标样1501875145标样2752876718标样31003750275标样4125460785

5、1丙酮标样标准曲线课后小结：本次仪器分析实验高效液相色谱混合物的定量和定性测定，学生通过仪器分析实验，基本了解高效液相色谱的性能及操作，掌握高效液相色谱分析的基本原理，学习高效液相色谱混合物的定量和定性分析，为以后从事仪器设备开发和设计工作，打下良好的基础。