酵母型真菌的微生物学检验

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1、核酸检静直接的检分旖堆养现舉菌落苗逹5J酵母55KOH法Ji生化反应酵母型真菌的微生物学检验1.检验程序深部真菌检验程序见图23-8。絡床标本II经尚定标本生卄负最色法：龜色法亚甲眩奂色床

2、——r—般兰染色法1IPAS11黄光壤色法第筲图23・82.标木米集根据感染部位的不同，米集不同的标木。米集标木时应避免病灶周围止常菌群污染。对于疑似隐毬菌性脑膜炎患者，以腰椎穿刺术无菌釆集脑脊液3〜5ml,特殊情况可采用小脑延髓池或脑室穿刺术，标木采集后应立即送检。3.标本直接检查(1)直接显微镜检查：取标本直接涂片，革兰染色后镜检，显微镜下见到革兰阳性、圆形或卵圆形菌体或他子

3、及假菌丝(图23-6),可确认为念珠菌感染。克柔念珠菌可见假菌丝成对称分枝，有细氏的芽生抱子。光滑念珠苗镜下可见卵圆形芽生他子，细胞尖端单芽,无真假菌丝，不产生厚壁他子。用患者脑脊液作墨汁负染色检查是诊断隐球菌脑膜炎最简便、快速的方法。常规细胞染色可发现隐球菌，但易误诊和漏诊。如用PAS染色后新生隐球菌呈红色。核酸检静直接的检分旖堆养现舉菌落苗逹5J酵母55KOH法Ji生化反应酵母型真菌的微生物学检验1.检验程序深部真菌检验程序见图23-8。絡床标本II经尚定标本生卄负最色法：龜色法亚甲眩奂色床

4、——r—般兰染色法1IPAS11黄光壤色法第筲图23・82.标木米集根

5、据感染部位的不同，米集不同的标木。米集标木时应避免病灶周围止常菌群污染。对于疑似隐毬菌性脑膜炎患者，以腰椎穿刺术无菌釆集脑脊液3〜5ml,特殊情况可采用小脑延髓池或脑室穿刺术，标木采集后应立即送检。3.标本直接检查(1)直接显微镜检查：取标本直接涂片，革兰染色后镜检，显微镜下见到革兰阳性、圆形或卵圆形菌体或他子及假菌丝(图23-6),可确认为念珠菌感染。克柔念珠菌可见假菌丝成对称分枝，有细氏的芽生抱子。光滑念珠苗镜下可见卵圆形芽生他子，细胞尖端单芽,无真假菌丝，不产生厚壁他子。用患者脑脊液作墨汁负染色检查是诊断隐球菌脑膜炎最简便、快速的方法。常规细胞染色可发现隐球菌

6、，但易误诊和漏诊。如用PAS染色后新生隐球菌呈红色。23-6自念珠菌(2)G试验：也称螯试验，可测定1-3-[3-D-葡聚糖，后者是多种不同种类真菌细胞壁的共冇成分，部分可激活马蹄蟹的I•办同凝集酶-G因子，用显色反应经分光光度计可测定其浓度。血液及无菌体液屮检出1-3-P-D-葡聚糖为深部真茵，如念珠菌、曲霉菌和酵母菌等感染的标志,但不能确定为何种深部真菌感染。(3)抗原检测：取患者血淸做ELISA、免疫印迹法等检测口念珠菌抗原，如烯醇化酶、甘霜聚糖抗原及念珠菌热敏抗原。(4)抗体检测：早期诊断可釆用患者血清作ELISA夹心法、免疫酶斑点试验,方法简便、快速。也可

7、用乳胶凝集试验和对流免疫电泳试验等检测血清屮抗口念珠菌抗体。(5)核酸检测：用PCR法将白念珠菌DNA分子扩增后以分子探针检测，具冇较好的敏感性和特异性。现冇学者提出用短肽噬菌体展示技术与EL1SA结合，高分辨率熔解曲线与真菌通用引物PCR结合鉴定门念珠菌及其他念珠菌。1.分离培养将标本接种在沙保弱培养基上，25°C或37°C培养1〜4天后，口念珠菌可在培养基表面出现奶油色类酵母型菌落，镜检可见假菌丝和芽生抱子。热带念珠菌在沙保弱强基上形成色暗而干燥的菌落。克柔念珠菌在沙保弱琼脂培养基上25°C培养2〜3天，呈扁平、干燥、灰黄色、可见皱褶菌落。光滑念珠菌在沙保弱培养

8、基上25〜37°C培养2〜3天，形成奶油色乳酪样菌落。将标本接种在沙保弱培养基上，病原性隐球菌在25°C和37°C培养的可生长,而非病原性隐球菌在37~C时不生长。培养2〜5天后观察菌落形态特点，并取菌落作印度墨汁负染色镜检。5.鉴定（1）念珠菌1）芽管形成试验:将念珠菌接种于0・2〜0.5ml人或动物血清中,37°C培养1.5〜4小时，镜检观察有无芽管形成。白念珠菌可形成芽管，但并非所有的口色念珠菌都形成芽管，其他念珠菌一般不形成芽管。试验时应设立阳性对照（口色念珠菌）和阴性对照（热带念珠菌）。但热带念珠菌在血清小培养6小时或更久吋也可形成芽管，所以要注意试验培养

9、时间。2）厚膜砲子形成试验：将念珠菌接种于玉米粉培养基25°C培养1〜2天后，仅口色念珠菌在菌丝顶端、侧缘或中间形成厚膜孑包子。3）糖同化或发酵试验：念球菌凡能发酵某种糖，一定能同化该糖，故只需做那些不被发酵糖的同化试验。糖发酵试验是将培养物接种糖发酵管，25°C培养，一般观察2〜3天，对不发酵或弱发酵管可延长至10天或2〜4周。同化试验所有的基础培养基含（NHJ2SO4、KH2PO4、MgS04*7H20>CaCl2>2H20.NaCl和酵母浸膏,试验时再分别加入齐种糖。同时以葡萄糖和基础培养基作对照。观察结杲时要观察有无酵母生长或液体培养基是否变混浊。各种念