真菌及其毒素的检验

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1、第十四节真菌及其毒素的检验一真菌的形态特征真菌细胞单细胞单细胞呈园或椭园形，常见于酵母和类酵母菌，多细胞多细胞呈丝状，交织在一起成菌丝体，常见于霉菌。1.酵母：大多数为单细胞，卵园形，园形，园栓形或柠檬形，大小和形态，随日龄及环境条件而异，即使在纯培养中，各个细胞的形状，大小亦有差别，在酵母菌的生长过程中形成假丝酵母。假丝酵母:由成熟的细胞和未分化完的细胞连在一起，形成假菌丝，此种酵母称假丝酵母。大多数酵母菌在适宜的培养基上，形成菌落与细菌相似，比细菌的菌落大，表面湿润，粘稠易挑起，有些因时间长而表面皱宿，其色多为乳白色，少数呈红

2、色。菌的颜色、光泽、质地、表面及边缘特征均有鉴别意义。液体培养：有的底部产生沉淀，有的均匀生长，有的在表面生长并形成菌膜或菌醭，厚薄也因种而异，有的甚至干而皱缩，菌醭的形成及特征有分类意义。酵母菌的繁殖无性繁殖：芽殖生殖：多边出芽，两端出芽，三边出芽。芽裂：一端出芽。裂殖：横分裂，如细菌。有性繁殖：由两个有性细胞结合，结合在一起后两个细胞间膜破裂，两个单倍体核向一起集中，最后形成一个繁殖的细胞。2.霉菌：霉菌均由分枝或不分枝的菌丝构成，许多菌丝交织在一起形成菌丝体，菌丝在光学显微镜下呈管状，2～10um比一般细菌放线菌细胞大几倍至

3、几十倍，与酵母菌相似，而其菌丝又分为有隔菌丝和无隔菌丝，再就是根据其功能不同又分为营养菌丝，气生菌丝。无隔菌丝：菌丝为长管状，单细胞，细胞质内含多个核，其生长过程只表现为菌丝的延长和细胞核的裂殖增多，以及细胞质的增加，如毛霉，根霉，犁头霉。有隔菌丝：为大多数的。菌丝由横隔膜分隔成成串的多细胞，每个细胞内含有一个或多个细胞核，有些菌丝外观看起来像多细胞，但横隔膜上有小孔，使细胞质或细胞核，可自由流通，每个细胞功能也相同，如青、曲、白地霉。霉菌的菌丝据其功能又可分为：营养菌丝，气生菌丝。营养菌丝（基质菌丝）就是在生长过程中，伸入到培养

4、的基质中，为真菌提供营养的菌丝。气生菌丝图（繁殖菌丝）它主要是伸入到菌周的空气环境中，它主要作用是产生孢子，产生孢子时的气生菌丝称繁殖菌丝。霉菌的繁殖主要是由繁殖器官产生孢子，繁殖器管是由繁殖菌丝产生的可以是单细胞，也可是多细胞，有时产生无性孢子，有时产生有性孢子，如青霉，曲霉，在生长过程中，由于生长条件的改变，有时产生有性孢子，有时产生无性孢子，但主要还是以无性孢子为主。有性孢子：子囊孢子，结合孢子，卵孢子，担孢子。无性孢子：分生孢子，关节孢子，芽生孢子，孢子襄孢子，厚膜孢子。三真菌的培养真菌的生长对营养的要求不高，一般马龄薯葡

5、萄糖琼脂、沙堡弱、花生c-d，察氏，保存菌种用察氏培养基。霉菌培养温度22～28℃，PH6.5～6.8最适宜，但它可在PH1.7～9.3的环境中生长，一般在温度稍高，湿度较大的环境中生长。真菌的菌落有以下三种类型：1．酵母型菌落：类似于一般菌落，菌落光滑，湿润，柔软致密，显微镜检查可见圆形或椭圆形的生芽细胞，多见于酵母菌、隐球菌。2．丝状菌落：菌落蔬松，呈棉絮状，绒毛状或粉末状，一部分菌丝向上空生长并形成孢子，另一部分菌丝伸入培养基下层，培养基的正面和背面可显示各种不同颜色。。3．酵母样菌落：外观性状同酵母型菌落，但在菌落表面除见

6、生芽细胞外，还有假菌丝伸入培养基中，念珠菌。四产毒霉菌的检验1．样品的采取（1）患病畜禽的病变组织，无菌采取脓汁、肺、肾、肝等，置培养皿中待检：（2）被毛、皮屑、或痂皮，用作皮肤致病性真菌采样时，先在病灶部涂以消毒液，然后用消毒镊子将毛连根拨出，或夹取痂皮、皮屑放入灭菌容器中待检。（3）粮食谷物：根据粮屯、粮垛大小和类型，分层定点（一般分三层，五点）取样，或分层随机采取不同点的检样，充分混匀，取500g左右作检验用。（4）动物饲料：包括干草等一般饲料，发酵饲料，以及发霉的谷物，分层随机取样或采霉变部分，取500g做检验（5）动物性

7、食品：如肉禽、乳及其制品，用灭菌工具采集可疑样品250g左右，装入灭菌容器中。2．样品的处理与分离培养(1)谷物、粮食①内部真菌的分离取样品10～20克，培养前将样品在0.1％升汞中浸泡（玉米、麦粒1～2分钟、米粒0.5分钟），然后用灭菌蒸馏水冲洗3～4遍。或直接用无菌水淘洗，加水应超过样品1～2cm，振荡1分钟倒去水，反复10次。后再用75％酒精浸泡1～2分钟，脱去蜡质膜，再冲洗。用灭菌的小镊子将上述经过处理的检样，胚部向下按等距离排列接种于高渗察氏琼脂培养基平板上，接种时，必须将检样（粮粒）部分地种入培养基中，每个平板接种数量

8、大粒约为5粒，小粒为10粒，每份检样共接种100粒，接种完毕后，置25～28℃培养一周，培养期间应注意观察和记录。②表面真菌的分离：将检样用无菌水洗涤2～3次后，按上法接种，培养和观察即可。（2）动物饲料（干草、发霉谷物等）：将干草剪成1cm左右，