《兽医临床诊疗技术学教学课件》讲义05

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1、第十章血液生化检验第一节常检的血液生化项目一、血清总蛋白测定(双缩腺法)(••)原理在强的碱性条件下，蛋白质或多肽的肽键可与硫酸铜溶液产生紫色反应，在540mn波长处的吸光度与蛋白的含量成正比。产生此反应的最简单的化合物是双缩W(H2N-CO-NH-CO-NH2),故称双缩服反应。㈡器材与试剂1.分光光度计，微量吸管。2.双缩腺试剂：用新鲜蒸憎水溶解硫酸铜(CuSO,・5He)3.0g,酒石酸钾钠9.Og,碘化钾5.0g;加入刚配制的6mol/L盘氧化钠100ml,再用蒸徭水稀释至近1L吋摇匀，加蒸馆水至1L。充分混匀置聚乙烯瓶内，盖严保存。3.总蛋白标准液：50.00g/L,或标定

2、蛋白含量的标准混合血清。㈢操作取血样、标准液、质控血清(或生理盐水)各50U1,均分别加入双缩服试剂5.0ml,混匀，置37°C水浴30niin后，于540nm处比色，以空白试剂调正吸光值至零，读取各管吸光值。㈣计算(Au-Ab/As-Ab)X50=血清总蛋白(g/L)注：Au、As、Ab分别为样品、标准液、空白的吸光值。参考值：健康动物的蛋白含量(g/L)如下。总蛋白白蛋白球蛋白A/G马5&1-76.521.5-33.527.0-52.00.62-1.45黄牛68.0-94.534.0-55.529.5-59.0奶牛85.5-12236.0-63.033.3-74.50.84-0.

3、94猪79.0-10320.0-46.031.0-82.00.37-0.51犬5&0-79.034.0-45.020.0-37.00.60-1.10猫54.0-79.026.0-33.026.0-51.00.45-1.20㈤注意事项1•本法配方是国际临床化学学会(IFCC)推荐，在实际使用时，测定液常会出现混浊现象，原法中每个样品须做测定空白管。建议将试剂屮各组分适当减少至硫酸铜1.5g,酒石酸钾钠6.0g,碘化钾3.0g,氢氧化钠不变，可以减少混浊。但显色线性将有损失，不过按本法的样品与试剂用量比例(1:100)，测定仍无影响。2.本法适于手工与自动检测，但敏感性不高，适用于血清及

4、蛋白含量在20g/L以上的样品，脑脊液、尿液等不适用。3.胆红素在0.25g/L、lib在lg/L以下的血清基本无干扰。4.结果的准确性与蛋白标准液是否准确，质控措施是否落实有较大关系。(为临床意义1•血清总蛋白升高：①血液浓缩，见于脱水症如高热、下痢、腹泻、大面积烧伤等；②血浆蛋白合成异常亢进，见于骨髓瘤。2.血清总蛋白降低：①血中水分潴留；②血浆蛋白合成障碍，如肝硬化；③蛋白大量丢失，如肾病综合症屮大量蛋白尿；大出血；严重烧伤后大量血浆渗出；缺乏硒-维E时的渗出性素质；④营养不良，蛋白摄入不足；⑤吸收不良，如下痢、球虫病等。〔附〕折射法㈠特点本法无需试剂，只用血清(或尿液、渗漏液

5、等之液状样品)1滴，即可直读样品蛋白含量和比重；折射计体积小巧、携带方便，使用便捷；检测时不必使用其他设备与能源，成本低廉；检测范围为0〜120g/L、精确度可达2.0g/Lo㈡器材D-2型蛋白屈折计；胶头吸管；擦镜纸。㈢操作1.调焦：将屈折计物镜朝光亮处，调节目镜视度调节环，使刻度清晰可见。2.调零：力口1滴蒸憎水于棱镜面，关闭盖板后调节校正W线，使明暗界线与W线一致。3.检测：打开盖板并擦净棱镜端面后，滴入1〜2滴血清样品再关闭盖板，目视到明暗分界线所对应的数据即为所求之数值。㈣注意事项1.被检血清不宜放置过久，否则会因蒸发而使血清变浓，测定值偏高。2.要避免血清溶血；加血样时，

6、切勿出现气泡；血量要加足使充满整个视场并涂抹均匀，至明暗界线清晰可见。3.每测完一个样本后，务必要擦干、清净棱镜面，然后再测其他样本。4.本法不适于高脂血、高色素血的蛋白检测。二、血清白蛋白测定C臭甲酚绿法)㈠原理在pH4,白蛋白带正电荷，能与阴离子染料淚甲酚绿(BCG)结合，使BCG试液从黄色转变成绿色。绿色的深浅与口蛋口浓度成正比。BCG与口蛋口反应迅速，而与球蛋白反应则慢而弱，故立即比色，球蛋白对其基本无干扰。㈡器材与试剂1.分光光度计微量吸管2.BCG试剂：BCG150mmol/L；柠檬酸缓冲液75mmol/L；叠氮钠1.5mmol/L；Brij-35(聚氧化乙烯月桂醛)2・

7、4g/L；pH4・2。在约0.9L蒸馄水中溶解BCG钠盐10&0mg、无水柠檬酸19.2g、叠氮钠lOOmg、Brij-35(300g/L)8ml,混匀后用lmol/L氢氧化钠调pH至4.20,加水至1L。3.白蛋白标准液：40.00g/L。㈢操作血清、标准液及生理盐水各20ul,分别加BCG试剂4.0ml,混和，于室温放置10分钟后比色，628nm处以空白试剂调零，读取各管吸光值。㈣计算(Au-Ab/As-Ab)X40=血清白蛋白(g/L)参考值见血清总