克隆策略复习题及答案

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1、克隆策略复习题及答案一、填空题1.克隆策略有三层含义：①采用什么样的技术路线将目的基因中克隆出来；②用什么方法将目的基因同载体连接；③通过什么方法将体外连接的DNA分子导入适当的受体进行扩增或表达。2.假定克隆一个编码某种蛋白质的基因，必须考虑其表达的三个基本条件：①保持正确的可读框；②能够使其转录的启动子；③具有翻译的起始和终止信号。3.现有的基因克隆策略大体上分为四类：功能克隆、定位克隆、表型克隆、电子克隆。4.受体细胞的感受态是接受外源DNA的生理状态。5.DNA重组连接的方法大致分为四种

2、：①黏性末端连接；②平末端连接；③同聚物加尾连接;④接头/连接子连接。6.将含有外源基因组一个酶切片段的质粒称之为含有一个基因组DNA克隆，各种此类质粒的集合体称之为构建了一个基因组DNA文7.将含有一个mRNA的DNA拷贝的克隆称作一个cDNA克隆，源于同一批RNA制备物的克隆群则构建了一个cDNA文库。8.在构建cDNA克隆之前，可以用差示杂交来富集一特殊的核昔酸序列。做法是：用来自于能够产生目的蛋白的细胞mRNA分子同来自于另一类型细胞（不产生这种蛋白质，但亲缘关系密切）的过量mRNA分子

3、杂交。1.一旦克隆了一个遗传定位的基因，就可以用染色体步移技术来鉴定基因组DNA文库中与之相邻的基因克隆。10.只要知道基因组中某一特定区域的部分核昔酸组成，用聚合酶链式反应（PCR）可以将这段DNA进行百万倍的扩增。11.SD序列是mRNA分子中同核糖体RNA结合的序列，其结构特征是AGGAGG的全部或一部分。12•环状质粒的转化效率很低，通常是线性双链DNA转化效率的1%。13.cDNA技术是进行真核生物基因克隆的一种通用方法，因为它可以用mRNA为模板，通过反转录合成一个双链的.无内含子的

4、基因，因而有利于在原核细胞中进行功能表达。14.产生平末端的方法通常有：①平切的酶；②S1核酸酶切除黏性末端；③DNA聚合酶补平黏末端。15・人工感受态的大肠杆菌细胞在温度为0°C时吸附DNA,42°C时摄入DNA。16.影响酶切的主要因素之一是底物DNA,底物的影响包括DNA的浓度、DNA的纯度.DNA的二/三级结构、识别位点和邻近的特异性17・Sall是识别6个核昔酸的酶，其识别切割的理论值是4096个碱基就有一个切点，但在哺乳动物中，大约300kb才有一个切点。18.在精简基因组文库中，用

5、标记的突变体DNA同未标记的野生型DNA杂交，最后建成的是缺失部分的DNA库。18.构建基因组文库时连接方法主要是粘性末端连接法;而构建cDNA文库，可用接尾连接法或人工接头连接法。19.将携带有外源基因并能持久传递给子代的动物称为转基因动物,这些外源基因就叫做转移的基因o21・为了提高重组DNA分子对Ecoli的转化效率，通常可采取CaC12处理和42°C处理2min。22.含有多种限制性内切核酸酶识别序列的DNA片段称为多接头/MCS/多克隆位点。23・两个基因融合所编码的新蛋白称为融合蛋白

6、。二、选择题(单选或多选)1・重叠群(contig)是一群克隆，在这个克隆群体中每个个体(A)。A.相互之间部分重叠B.都是来自不同生物的克隆C.插入片段位于不同染色体的不同区段D.位于同一染色体的不同区段2.根据构建方法的不同，基因文库分为基因组文库、cDNA文库等。在下列文库中(c)属cDNA文库。A.YAC文库B.MAC文库C.扣减文库D.BAC文库2.下面关于多克隆位点（MultipleCloneSite,MCS）的描述，不正确的一项是（A）oA.仅位于质粒载体中B.具有多种酶的识别序列

7、C.不同酶的识别序列可以有重叠D.般是人工合成后添加到载体4.A.控制DNA聚合酶的用量B.控制酶反应的时间部分填补是DNA体外重组中常用的一种技巧，填补时应（C）。C.限制dNTP的种类D.注意只能填补载体5.EcoRI切割载体DNA和供体DNA所产生的片段在用于重组连接前要（B）。A.用65°C处理5〜lOmin使限制性内切核酸酶失活B.用CIP处理载体DNA防止自身环化C.进行琼脂糖凝胶电泳检测D.上述说法都正确6.在cDNA技术中，所形成的发夹环可用（C）。A.限制性内切核酸酶切除B.用

8、:T切核酸酶切除C.用S1核酸酶切除D.用5,切核酸酶切除7.在DNA的酶切反应系统中，通常（ABC）。A.用SSC缓冲液B.加入Mg2+作辅助因子C.加BSA等保护剂D.上述说法中，有两项是正确的8.黏性末端连接法，不仅操作方便，而且（B）。A.产生新切点B.易于回收外源片段C.载体不易环化D.影响外源基因的表达9.关于DNA接头在基因工程中的作用，下列说法中哪一项不正确?A.给外源DNA添加适当的切点B.用于人工构建载体C.调整外源基因的可读框D.增加调控元件1.DNA的结构对转化的影响很大