白芸豆中α-淀粉酶抑制剂的提取纯化研究计划

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1、研究生年级姓名、学学I院（、系、部）专业学科任课教师考试日期考试成绩教师签字全日制专业学位硕士爲比农林韦枚大学NorthwestA&FUniversity研究生课程考试试卷（课程名称：植物生物技术概论）学位课13选修课口2013级侯夏乐2013050125农学院作物学韩德俊2013年12月白芸豆中a-淀粉酶抑制剂的提取纯化研究计划研究背景a■淀粉酶抑制剂（a-amylaseinhibitor,简称a・AI）是一种天然生物活性物质，属于糖昔水解酶的一种，国外称Z为"starchblocker^oa・AI能抑制肠胃道内唾液、胰淀粉酶的活性，阻碍或延缓人体对食物中主要的碳水化合物

2、的水解和消化，降低食物中淀粉糖类物质的分解吸收，从而起到降低血糖、血脂的作用，抑制血糖浓度的升高，从而有利于糖尿病患者的饮食治疗。对于肥胖患者，可减少糖向脂肪转化，延缓肠道排空，增加脂肪消耗以减轻体重。因此，可以用a・AI來防止和治疗肥胖症、脂肪过多症、动脉硬化症、高血脂及糖尿病等。天然存在的a-AI主要有3种类型，分别为山（1）微生物产带一个寡生物胺单位的含氮碳水化合物；（2）微生物产多肽，如paim（来自微生物的猪胰a・AI淀粉酶抑制剂）和Haim（微生物起源人a■淀粉酶抑制剂）;（3）在豆类、谷类及其他较高等植物中发现的大分子蛋白质抑制剂。Bowman（1945年）首

3、次报道从芸豆中获得a-All2]o白芸豆中提取的a,AI是一种具有N端糖基化的糖蛋白[%作为一种热稳定的糖蛋白，a-AI是在内质网上合成，储存在液泡内，要经过蛋白水解酶水解去抑制作用才能成为有活性的a-AIo芸豆中发现的a・Al⑶已有3种，分别是aAI-kaAI-2和aAI-3o其中从芸豆中分离纠的aAI-1,是由两个糖肽亚基a（7.8kD）和B（14kD）组成。它能抑制猪胰腺淀粉酶（PPA）、人胰腺淀粉酶、人唾液腺淀粉酶和一些鞘翅昆虫四纹豆象、绿移象、粉虫的Q■淀粉酶。张琪等的实验研究表明⑷a-AI能降低小肠各部分尤其是小肠前端的二糖酶活性。由此可推测a-AI抑制了与淀粉

4、吸收相关的胃肠道内多种淀粉酶的活性，使食物中大虽的糖类主要在小肠的末端才被吸收，从而延长了食物在肠道中的消化吋间，导致机体吸收葡萄糖的速率下降，因而可有效改善小鼠进食后血糖波动情况，使葡萄糖耐量曲线变得平缓，保持血糖餐后稳定在止常水平或接近止常水平范围内，因此起到降低血糖及治疗糖尿病的作用。通过建立人鼠食饵性高脂血症模型，发现［习a・AI调节血脂的机制可能与其抑制淀粉酶活性有关。淀粉糖类物质的摄取减少，可使脂类在体内的合成减少，并使一部分脂类转化成糖以供机体生理的需要，从而起到降低血脂的作用。可降低血清及肝脏MDA含量，升高SOD活性，表明其可通过抑制脂质过氧化物的产生及提

5、高自身抗氧化酶活性，从而发挥抗动脉粥样硬化作用。LeonardoCelleno等的实验研究显示⑹，作为实验对象的肥胖者（男性和女性）给予每天富含碳水化合物（2000-2200卡路里）的食物，同时食用含白芸豆提取物的药物，其作为一种主要的影响因素，能显著减少体内的脂肪近而减轻体重。这种白芸豆提取物在减轻和维持正常体重方面体现出其安全性和高效性。研究目的和意义随着社会生活水平和经济收入的提高，人们对食品安全和自身健康有了更高层次的要求。从天然食品屮寻找具有生物活性的功能因子，因为具有更高的安全性和功效性，成为保健食品研究开发中最活跃的前沿领域。特别是在现代营养学和现代生命科学研

6、究的基础上,开展对天然产物活性成份的分离、纯化、结构测定及功效关系的研究更是促进人类健康的一项极为重要的研究课题。a-AI是一种新型糖尿病治疗药物,它以人体糖代谢的关键酶甜淀粉酶为作用靶点，通过抑制其生物活性，减少食物中碳水化合物的消化吸收,减少脂肪&成，从而起到降糖、降脂和减轻体重的作用。与其他降糖减肥产品相比，具有安全无毒、耐受性好的特点，尤其适合长期使用以达到预防和治疗的作用。亚洲人的饮食结构以淀粉为主，因此从控制机体糖代谢屮的关键酶的活性入手，开发淀粉酶抑制剂对特定人群的降糖、降脂及减肥具有极人的应用前景。芸豆是我国主要的食用豆类，在我国已有500年的种植历史，其不

7、仅营养丰富，而且具有药用价值，是我国传统的药食同源食品。白芸豆中含有较高活性的a-淀粉酶抑制剂，其化学成分为一种复合糖蛋白，结合糖蛋白的分离和结构研究方法，对白芸豆中a・AI的提取、纯化、组成结构、理化性质、生物活性、构效和量效关系进行全面系统的研究，既可为白芸豆a■淀粉酶抑制剂的保健产品开发提供理论基础和应用依据，也可为其它功能性糖蛋白的研究和开发提供方法借鉴。本研究在现有研究的基础上，参考现有文献资料和糖蛋白分离纯化的方法，确定最佳的a-淀粉酶抑制剂提纯工艺，并对白芸豆中的a-淀粉酶抑制剂糖蛋白的超滤提取工艺进