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《微量定磷法测定红细胞钙调素含量》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、生物化学杂志,第卷第期年,月微里定磷法测定红细胞钙调素含量郡佳程吴兆锋刘秉文华,西医科大学生化教研室成都。摘耍礴酸二醋晦在钙调素漱活下水解为后者经蛇毒水解为。无机碑酸和腺普用孔雀绿显色浏定无机礴酸量与标准比较即可侧出活。,,。性该法浏定灵敏度息可范围一批间变异系数一,,纯化的红细胞经超声破碎沸水浴加热离心上清与标准所作的,。,碑酸二脂晦平行激活曲线吴正相关含量浏定,。林间变异系数回收率士本法浏得例正常人含全士,为性万之问无显著差异,,,关键词钙调素红细胞碑酸二醋晦〔‘’,钙调素除用放射免疫法测定外大多借激活磷酸二醋酶,,。,,,,的活性来测定放射免疫法
2、灵敏度高特异性强但抗血清难以获得需特殊设备具放,。,,射线损害且不能测定生理活性的量激活活性测定法中常量定磷法灵敏度太低,,,光吸收法测定法定量法和偶联酶法或是由于测定条件难以重复或是需要特殊,。,,昂贵设备及试剂现已很少应用放射酶法是目前常用的方法其灵敏度接近放免法又能,测定生理活性的含量但仍有某些不足标记的水解产物需经分离有一定放射线。损害一般实验室尚不具备条件一,我们在常量定磷法的基础上加人孔雀绿显色定磷代替单一的氧化还原定磷显著提高,。,,,了灵敏度其灵敏度亦接近放射免疫法加之本方法操作简单颜色稳定重复性好不需,。特殊设备适于一般实验室应用材料
3、和方法、,一磷标准曲线试管中加入磷标淮液拼一加双蒸水加够拼,一,体积磷试剂铂酸钱盐酸孔雀绿一分钟后加,。人柠檬酸钠拼分钟至小时测值、〔“,,,二制备按等的方法制备的经鉴定无活性可被足量‘。激活倍、,三制备按都佳程等川方法猪脑匀浆上清加热℃分钟离心上清过一,,,柱缓冲液洗脱洗脱液再过柱收集国家自然科学基金资助项目现在川北医学院生化教研室一一,一一收稿日期修回日期,,。洗脱液再过柱收集第一蛋白峰得电泳纯、四标准曲线参考和的方法总反应体积拼应,、、用液拼单位一单位水解应用液一拌,一,,一应用缓冲液、。,,拼拌℃保温分钟沸水浴秒中止反应加蛇毒液,,。拼℃再保温
4、分钟加三氯乙酸“中止反应离心上清拌加磷试剂,。分钟至小时测值、〔,五提取液的制备及测定在方法的基础上采用淋巴细胞分离液,,,纯化抗凝血离心去血浆及表层等体积生理盐水稀释淋巴细胞分离,,,液加入管底离心分离的用生理盐水洗涤两次混悬于、,、,体积硼酸盐缓冲液硼酸硼酸钠,,,,,,户中计数超声破碎沸水浴冰浴冷却取离心上清液一。按标准曲线制作测定活性、。多六结果计算计数取三次重复计数平均值含量以,表示结果、。,,一磷标准曲线见灵敏度在一拌范围内与值呈直线关系,批间变异系数一加显色剂后小时。值稳定、。,二标准曲线见结灵敏度可测自口一,。定范围批间变异系数一、。三
5、平行激活曲线见相关系数,,批间变异系数一写。。显示提取液符合测定要求、四影响测定的因案纯度我仁乒““〕匀们比较了方法和我们所用方法分离的纯山落只口价﹃日。昙叫月一划山巴石的一长。补︵︹日。邢甲妇闰口山一﹃卜卜。零一祠国口山门认书口卜。卜﹄洲丫艺二幻七七七,。,。度及测定值结果见表可见法分离的中污染血小板甚多测定结果偏高七七弓七七,,。士产。。。。士七,抗凝剂用肝素钠和柠檬酸钠抗凝作比较显示肝素钠抗凝测定结果士士一,。高于用柠檬酸钠抗凝测定结果、,士,。五回收率经次重复回收测定回收率为符合测定要求、,六例正常人含量测定经测定例正常人男女含量为,。土性别之
6、间无显著差异讨论川,“,用放免法测定灵敏度为用放射酶法测定灵敏度,,。为我们用微量定磷法测定灵敏度达到显示了本法的高灵敏度加之操作简,,,,。单稳定不需特殊设备无放射性损害较适于一般实验室应用提取液和纯化激活曲线极相关,,,再加上〔,,。中能够激活的只有因此提示本法测得的是〔“,士,本法测得正常人含量较报道的为低其原因可,〔“。能是①我们分离的污染血小板很少而血小板的含量较高约倍②我们,,二,采用的是柠檬酸钠抗凝血经比较其测定结果比肝素钠抗凝血低。,,,在动物体中含最少既然用本法能成功地测定显然也应适用于其它组织,。的测定对此我们将另文报道参考文献介招
7、,。」吕‘礴‘梦勿犷日一,‘五,〕仍一万‘五。心招旧名犷切夕梦,,。一“。,豹一。〕那佳程等华西医科大学学报,。乞万‘几夕。￡梦,“‘,〕日,,‘,,〕一,‘云协,,。〔〕一”日“,,〕仍一口宕“仍,,〕一,一,一,一尹哄界艺玄,犷,‘落。,云‘,玄泞葱。,“一一一写,,一一,士士,,,一,,
