GB-T5413.25—1997婴幼儿配方食品和乳粉肌醇的测定

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1、免费标准下载网(www.freebz.net)GB/T5413.25—1997前言本标准等同采用美国公职分析化学师协会（AOAC）方法，测定的是具有生物效价的肌醇含量。本系列标准从实施之日起，代替GB5413—1985。本标准由中国轻工总会提出。本标准由全国乳品标准化中心归口。本标准负责起草单位：国家乳制品质量监督检验中心。本标准参加起草单位：卫生部食品卫生监督检验所、浙江省轻工业研究所、哈尔滨森永乳品有限公司、雀巢（中国）投资服务有限公司。本标准主要起草人：张玉杰、王芸、房玉国、王克新。中华人民共和国国家标准婴幼儿配方

2、食品和乳粉肌醇的测定Milkpowderandformulafoodsforinfantandyoungchildren-DeterminationofinostitolGB/T5413.25—19971范围本标准规定了肌醇的测定方法。本标准方法一适用于婴幼儿配方食品和乳粉中肌醇的测定，方法二适于乳粉中肌醇的测定。方法一微生物法2方法原理通过Saccharomycesuvarum的生长情况来评价肌醇的含量。3试剂、菌种和培养基所有试剂，如未注明规格，均指分析纯；所有实验用水，如未注明其他要求，均指三级水。3．1盐酸：体积

3、比为1：1将体积分数为37%的浓盐酸50mL用水稀释至100mL。3．2氢氧化钠：c(NaOH)为1mol/L将40g氢氧化钠溶解于水中，稀释至1000mL。3．3肌醇标样：无水晶体。3．4菌种国家技术监督局1997—05—28批准1998—09—01实施免费标准下载网(www.freebz.net)无需注册即可下载免费标准下载网(www.freebz.net)GB/T5413.25—1997Saccharomycesuvarum。3．5培养基3．5．1链孢霉菌琼脂培养基：3号蛋白胨5g，酵母浸膏5g，麦芽糖40g，琼脂

4、15g。3．5．2肌醇测定用培养基：葡萄糖100g，柠檬酸钾10g，柠檬酸2g，磷酸二氢钾1.1g，氯化钾0.85g，硫酸镁0.25g，氯化钙0.25g，硫酸猛50mg，氯化亚铁50mg，DL-色氨酸800mg，L-胱氨酸0.1g，L-异亮氨酸0.5g，L-赖氨酸0.5g，L-蛋氨酸0.2g，DL-苯基丙氨酸0.2g，L-酪氨酸0.2g，L-天门冬酰胺0.8g，DL-天门冬氨酸0.2g，DL-丝氨酸0.1g，甘氨酸0.2g，DL-苏氨酸0.4g，L-缬氨酸0.5g，L-组氨酸0.124g，L-脯氨酸0.2g，DL-丙氨酸

5、0.4g，L-谷氨酸0.6g，L-精氨酸0.48g，盐酸硫胺素500μg，生物素16μg，泛酸钙5mg，盐酸吡哆醇1mg，加蒸馏水至1000mL，pH5.2±0.2（25℃）。4仪器常用实验室仪器及：4．1pH计。4．2250mL圆底烧瓶，与冷凝器连接的锥形玻璃接头。4．3比色仪。5样品制备5．1贮备菌种的制备5．1．1从纯菌种S.uvarum中转接2个以上已制备好的麦芽浸出汁琼脂斜面。30℃培养16～24h。贮于冰箱中，保存期不要超过2周，然后再转接到新的琼脂斜面上。5．1．2接种的准备最好在使用的当天从贮备菌种中转接

6、到新配制的麦芽浸出汁琼脂斜面上，30℃培养16～24h。用接种环无菌地转接该菌种到一个灭菌生理盐水中，直到得到一定浓度菌体细胞的悬浮液。为了测定，制备一个酵母菌悬浮水溶液，这个悬浮液中酵母菌的浓度在0.1mg/mL。分光光度计事先用水调到100%透光率，然后测定这个“标准”酵母菌的透光率。将新接种斜面中的菌体细胞移入到无菌生理盐水中，其浓度直到达到与上述标准溶液具有相同的透光率为止。5．2标准溶液5．2．1标准贮备液，肌醇的浓度为0.2mg/mL。称取100mg肌醇（该肌醇标样已放在干燥器中干燥24h），于容量瓶中用水稀

7、释至500mL。贮于冰箱。5．2．2标准工作液，肌醇的浓度为2µg/mL。吸取5mL（5.2.1）溶液，用水稀至500mL，定容。当天制备。6操作步骤6．1样品的处理6．1．1干粉样品精确称取一定量样品，这些样品中约含肌醇0.5mg，移入250mL圆底烧瓶中，加100mL盐酸（1：1）（3.1），继续6.1.3步骤。6．1．2液体样品。吸一定量样品，这些样品中约含肌醇0.5mg，加100mL盐酸（3.1），继续6.1.3步骤。6．1．3将装样品的圆底烧杯与冷凝器联结，经过6h，通过蒸馏将盐酸除去。国家技术监督局1997—

8、05—28批准1998—09—01实施免费标准下载网(www.freebz.net)无需注册即可下载免费标准下载网(www.freebz.net)GB/T5413.25—1997将剩余物用蒸馏水冲到烧杯中，用1mol/L氢氧化钠将溶液的pH值调至5.1±0.1。稀释至250mL，过滤，弃去前部几毫升。这个溶液肌醇的浓