青鲨软骨血管生成抑制因子的制备【毕业论文】

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1、本科毕业论文（20届）青鲨软骨血管生成抑制因子的制备专业：药学目录摘要1Abstract21前言32实验材料与仪器32.1实验材料32.2主要试剂32.3仪器43实验方法43.1分离提取青鲨软骨总蛋白43.2(NH4)2SO4分级沉淀43.3抗氧化活性测定53.4鸡胚绒毛尿囊膜实验53.5离子交换层析63.6电泳实验73.7SephadexG-75凝胶过滤层析84实验结果与讨论94.1(NH4)2SO4分级沉淀结果94.2抗氧化活性测定结果104.3鸡胚绒毛尿囊膜实验结果104.4离子交换层析114.5电泳实验124.6SephadexG-75凝

2、胶过滤层析135实验小结155.1硫酸铵分级沉淀155.2柱层析方法155.3抗氧化活性研究165.4新生血管生成抑制因子16参考文献16致谢18[摘要]目的：软骨鱼软骨具有显著的血管生成抑制作用，是抗肿瘤新药研发的重要资源。因此，本课题从青鲨软骨中分离纯化出具有较强抗氧化活性的蛋白，并对其抑制新生血管的能力进行了比较分析。方法：青鲨软骨组织破碎后于PBS浸提，低温离心，(NH4)2SO4分级沉淀得粗蛋白。通过离子交换层析（IEC）和凝胶层析（GFC）进行分离纯化获得活性蛋白组分及单体，采用SDS-PAGE电泳检测蛋白分子量。利用DPPH清除率、

3、羟自由基清除率、还原力三种体外抗氧化实验测定分段部位和单体的抗氧化活性。结果：SDS-PAGE电泳结果所示，考马斯亮蓝染色显示为单一条带，证明已达到电泳纯，根据标准蛋白质的迁移率，测得其分子量为95.9kDa。运用鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）活性抑制模型进行药理学研究分析发现，8µg青鲨软骨血管生成抑制因子（BSFN）对新生血管的抑制率已经高达80.9%。实验表明它能显著抑制CAM膜新生血管生成，并且抑制效果具有一定的浓度依赖性。DPPH自由基清除率、羟自由基清除率、还原力三种体外抗氧化实验显示，BSFN在10mg/mL时DPPH清除率、羟自由基清除

4、率、还原力分别为82.68%、78.15%、0.398。结论：高纯度的鲨鱼软骨血管生成抑制因子在治疗肿瘤中的显著作用使其应用前景被广泛看好。研究结果对于新药源开发具有重要意义，也为软骨资源的高值化利用开辟一条新的途径。[关键词]青鲨软骨；血管生成抑制因子；抗氧化活性16ThePreparationofangiogenesisinhibitorinBluesharkCartilageAbstract:Objective:PreparationandactivityevaluationofangiogenesisinhibitorfromBluesh

5、arkCartilage.Method:BreaktheorganizationofBluesharkCartilage,andtakingitasrawmaterials,andwecanextractitwithPBS.Centrifuging,wecangetthecrudeproteinbyPrecipitating(NH4)2SO4.Inthisway,wecouldobtainactivitiveproteincomponentsandMonomerbyseparatingandpuringthroughIECandGFC.Evalu

6、atethemolecularweightwithSDS-PAGEelectrophoresis.Makeuseof·DPPHclearance,·OHclearanceandreducingpowerinvitrotoevaluatetheantioxidantactivityofsubpartsandmonomer.DetectingtheinhibitionofneovascularizationoftheCartilageproteinextracts,subpartsandthemonomerwithCAM.Result:Thepuri

7、fiedBSFNwashomogeneousasasinglebandonacoomasiebrilliantblue-stained12%SDS-PAGEgelelectrophresis.Accordingtothemigrationrateofstandardprotein,themolecularweightsofBSFNis95.9kDa.WithCAMactivityinhibitionmodel,theinhibitionrateofBSFNwasupto80.9%attheconcentrationof8µg.Moreover,t

8、hedosagesoftheangiogenesisinhibitorscorrelatedwiththeinhibitoryeffec