赤魟软骨血管生成抑制因子的制备【毕业论文】

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1、本科毕业论文（20届）赤魟软骨血管生成抑制因子的制备专业：药学18目录摘要3关键词31前言52实验材料与仪器52.1原料52.2试剂62.3仪器63实验方法63.1分离提取赤魟总蛋白63.2紫外吸收法绘制蛋白标准曲线并测定蛋白质含量[6]73.3抗氧化活性测定73.3.1清除DPPH自由基的能力测定（DPPH法）[7]73.3.2还原能力的测定（铁氰化钾还原法）[8]73.3.3清除羟自由基能力的测定（邻二氮菲—Fe2+氧化法）[9-11]73.4离子交换层析[12]83.4.1celluloseED-52部分参

2、数83.4.2实验步骤83.4.3电泳实验[13]93.5凝胶过滤层析[14]103.5.1SephadexG-75的预处理103.5.2安装层析柱103.5.3填装103.5.4平衡103.5.5上样113.5.6洗脱113.5.7收集113.5.8保存113.5.9电泳实验113.6DAFN抑制鸡胚绒毛尿囊膜CAM血管生成的测定[15]114结果与分析114.1抗氧化活性测定114.1.160%硫酸铵提取物与100%硫酸铵提取物DPPH清除率的比较114.1.260%硫酸铵提取物与100%硫酸铵提取物羟自由基

3、清除能力的比较114.1.360%硫酸铵提取物与100%硫酸铵提取物还原力的比较124.2离子交换层析124.2.1紫外检测124.2.2抗氧化能力124.2.3高效液相分析124.2.4电泳实验分析134.3凝胶过滤层析134.3.1紫外检测数据134.3.2抗氧化能力144.3.3高效液相分析144.3.3电泳实验分析14184.4DAFN抑制鸡胚绒毛尿囊膜CAM血管生成的测定155小结165.1硫酸铵分级沉淀165.2柱层析方法165.3抗氧化活性研究165.4新生血管生成抑制因子16参考文献17致谢18附

4、录Ⅰ英文翻译19附录Ⅱ英文原文2818赤魟软骨血管生成抑制因子的制备[摘要]目的：从赤魟软骨中分离纯化出具有较强抗氧化活性的蛋白，并对其抑制新生血管的能力进行比较分析。方法：将赤魟软骨粉碎后离心，用(NH4)2SO4分级沉淀得粗蛋白，通过离子交换层析和凝胶层析进行分离纯化，电泳检测蛋白分子量，用DPPH清除率、羟自由基清除率、还原力比较分段部位和单体的抗氧化蛋白活性，比较其对鸡胚绒毛尿囊膜CAM血管生成的抑制程度。结果：经过分离纯化，得到了赤魟软骨血管生成抑制因子（DASN），提取率为1009:1；12%的SDS

5、-PAGE电泳结果所示，考马斯亮蓝染色显示为单一条带，证明已达到电泳纯，根据标准蛋白质的迁移率，测得其分子量为58.2kDa；运用CAM活性抑制模型进行药理学研究分析发现，8µgDASN对新生血管的抑制率已经高达82.7%，表明DASN能显著抑制CAM膜新生血管生成，并且抑制效果具有一定的浓度依赖性；DPPH清除率、羟自由基清除率、还原力三种体外抗氧化实验显示，DASN的清除率分别为84.41%、59.13%、0.262。结论：本实验运用多种现代分离技术从赤魟中分离得到的DASN具有显著的血管生成抑制作用，是抗肿

6、瘤新药研发的重要资源。[关键词]赤魟；新生血管抑制因子；抗氧化18PreparationofneovascularizationinhibitorfactorfromDasyatisakajeiAbstract：Objective:TheangiogenesisinhibitorswasisolatedandpurifiedfromDasyatisakjei,anditsantioxidantactivitiesandangiogenesisinhibitingeffectwerealsoevaluated.Me

7、thods:ThecartilageofDasyatisakjeiwaschoppedandextracted.Thesupernatantwascollectedandcentrifuged.Thecrudeproteinwasfractionedthroughprecipitationwithammoniumsulfateandcentrifugation.Thesedimentswerecollected,dialyzeandlyophilized.Thefollowingpurificationwasdo

8、nebyDE-52Sepharoseion-exchangecolumnchromatography.ThefinalpurificationwasdonebySephadexG-75repeatedlyuntiltheelectrophoresispatternwasfoundonlyoneband.Theantioxidantactivitieswereevaluat