微生物大小和数量的测定

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1、微生物大小和数量的测定一.实验目的1.了解显微镜测定微生物大小与血球计数板测定微生物数量的原理。2.学习并掌握显微镜下测定微生物细胞大小的技术，包括目镜测微尺、镜台测微尺的校正技术与测定细胞大小的技术。3.了解血球计数板的结构，学习并拿握血球计数板计数微牛物数量的技术。二.实验原理1.微生物大小的测定微生物细胞的大小，是微生物重要的形态特征之一，也是分类鉴定的依据之一。由于菌体很小、只能在显微镜下来测量。用于测量微生物细胞大小的工具有目镜测微尺和镜台测微尺。（1）口镜测微尺（图1）目镜测微尺是一块圆形玻片，在玻片中央把5

2、mm长度刻成50等分，或把10価长度刻成100等分。测量吋，将其放在接口镜屮的隔板上（此处正好与物镜放人的中间像重叠）來测量经显微镜放人后的细胞物象。由于不同目镜、物镜组合的放大倍数不相同，目镜测微尺每格实际表示的长度也不一样，因此目镜测微尺测量微生物大小时须先用置于镜台上的镜台测微尺校正，以求出在一定放大倍数下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度。图1目镜测微尺图2镜台测微尺（2）镜台测微尺（图2）镜台测微尺是中央部分刻有精确等分线的载玻片，一•般将1mm等分为100格，每格长lOurn（即O.Olnun）,是专门用來校

3、止目镜测微尺的。校止时，将镜台测微尺放在载物台上，由丁•镜台测微尺与细胞标本是处于同一位置，都要经过物镜和目镜的两次放大成彖进入视野，即镜台测微尺随着显微镜总放大倍数的放大而放大，因此从镜台测微尺上得到的读数就是细胞的真实大小，所以用镜台测微尺的已知长度在一定放人倍数下校正目镜测微尺，即可求出目镜测微尺每格所代表的长度，然后移去镜台测微尺，换上待测标木片，用校止好的目镜测微尺在同样放大倍数下测量微生物大小。2.血球计数板测定微生物数量镜检计数法适用于各种含单-细胞菌体的纯培养悬浮液，如有杂菌或杂质常不易分辨。菌体较大的酵

4、母菌或霉菌泡子可采用血球计数板；一般细菌则采用彼得罗夫•霍泽（PetroffHausser）细菌计数板。两种计数板的原理和部件相同,只是细菌计数板较薄，可以使用油镜观察。而血球计数板较厚，不能使用油镜，故细菌不易看清。血球计数板是一块特制的厚载玻片，载玻片上有4条槽而构成3个平台。中间的平台较宽，其屮间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上而各冇一个方格网（图3）。每个方格网共分9大格，其中间的一大格（乂称为计数室）常被用作微生物的计数。计数室的刻度有两种：一种是大方格分为16个屮方格，而每个小方格又分成25个小方格；另一种

5、是一个大方格分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格。但是不管计数室是哪一种构造，它们都有一个共同特点，即每个大方格都由400个小方格组成（图3）。每个大方格边长为1mm，则每一大方格的面积为hi赤，每个小方格的而积为1/400mm2,盖上盖玻片后，盖玻片与计数室底部之间的高度为0.liinn,所以每个计数室（大方格）的体积为0.lmm",每个小方格的体积为1/4000mm3o使用血球计数板直接计数吋，先要测定每个小方格（或中方格）中微生物的数量，再换算成每毫升菌液（或每克样品）中微生物细胞的数量。90.1mm1

6、/5b■■d•井#一・fXB-K-25血细胞计數板构逍（）A.正面图：B.纵切面图1.血细胞计数板：2・盖玻片：3.计数室小力恪申方格血细腿计玫板約珞妆人话的方阿格•申何人方格为计数立图3血球计数板的构造一.实验材料1•菌种酵母菌液，枯草芽泡杆菌斜面培养物。2•试剂美兰染液，结晶紫，蒸懈水等。1.仪器显微镜，目镜测微尺，镜台测微尺，血球计数板、盖玻片（22mmX22mm）、吸水纸、计数器、滴管、擦镜纸，酒精灯等。二.操作步骤1.目镜测微尺的校正把目镜的上透镜旋下，将目镜测微尺的刻度朝下轻轻地装入目镜的隔板上，把镜

7、台测微尺置于载物台上，刻度朝上。先用低倍镜观察，对准焦距，视野屮看清镜台测微尺的刻度后，转动目镜，使目镜测微尺与镜台测微尺的刻度平行，移动推动器，使两尺重叠，再使两尺的“0”刻度完全重合，定位后，仔细寻找两尺第二个完全重合的刻度，计数两重合刻度之间口镜测微尺的格数和镜台测微尺的格数。因为镜台测微尺的刻度每格长ioum,所以曲下列公式可以算出目镜测微尺每格所代表的长度。用此法分别校正在物镜倍数为10X,40X,100XF目镜测微尺每小格所代表的氏度。（注意事项：由于不同显微镜及附件的放大倍数不同，因此校正口镜测微尺必须针对

8、特定的显微镜和附件（特定的物镜、廿镜、镜筒长度）进行，而且只能在特定的情况下重复使用，当更换不同放大倍数的FI镜或物镜时，必须重新校正冃镜测微尺每一格所代表的长度。）1.细胞大小的测定（1）酵母菌的大小测定①取一滴酵母菌菌悬液制成水浸片。②移去镜台测微尺，换上酵母菌水浸片，先在低倍镜下找到目的物，然后在高倍镜下用口镜