微生物大小及数量的测定.doc

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1、山东大学实验报告2014年11月30日姓名班级13级生命基地班学号同组者：科目微生物学实验题目微生物大小及数量的测定组别3【实验题目】微生物大小及数量的测定【实验目的】1.了解显微镜测定微生物大小与血球计数板测定微生物数量的原理。2.学习并掌握显微镜下测定微生物细胞大小的技术，包括目镜测微尺、镜台测微尺的校正技术与测定细胞大小的技术。3.了解血球计数板的结构，学习并掌握血球计数板计数微生物数量的技术，包括样品的点样、菌数计数的方法与计算。【实验器材】1、菌种：酵母菌液，枯草芽孢杆菌2、试剂： 结晶紫

2、，蒸馏水，香柏油，二甲苯等3、仪器和用具： 显微镜，目镜测微尺，镜台测微尺，血球计数板、盖玻片、吸水纸、计数器、滴管、擦镜纸，酒精灯等【实验原理】一、微生物大小的测定1、测微尺的构造微生物细胞的大小，是微生物重要的形态特征之一，也是分类鉴定的依据之一。由于菌体很小、只能在显微镜下来测量。显微镜测微尺是由目镜测微尺和镜台接物测微尺组成。目镜测微尺图1目镜测微尺是一块圆形玻璃片，其中有精确的等分刻度，在5mm刻尺上分50份，或把10第8页共8页微生物实验报告山东大学实验报告2014年11月30日姓名班级

3、13级生命基地班学号同组者：科目微生物学实验题目微生物大小及数量的测定组别3mm长度刻成100等分。测量时，将其放在接目镜中的隔板上(此处正好与物镜放大的中间像重叠)来测量经显微镜放大后的细胞物象。由于不同目镜、物镜组合的放大倍数不相同，目镜测微尺每格实际表示的长度也不一样，因此目镜测微尺测量微生物大小时须先用置于镜台上的镜台测微尺校正，以求出在一定放大倍数下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度。镜台测微尺镜台测微尺是中央部分刻有精确等分线的载玻片，一般将lmm等分为100格，每格长l0μm（即0.0

4、lmm），是专门用来校正目镜测微尺的。校正时，将镜台测微尺放在载物台上，由于镜台测微尺与细胞标本是处于同一位置，都要经过物镜和目镜的两次放大成象进入视野，即镜台测微尺随着显微镜总放大倍数的放大而放大，因此从镜台测微尺上得到的读数就是细胞的真实大小，所以用镜台测微尺的已知长度在一定放大倍数下校正目镜测微尺，即可求出目镜测微尺每格所代表的长度，然后移去镜台测微尺，换上待测标本片，用校正好的目镜测微尺在同样放大倍数下测量微生物大小。目镜测微尺镜台测微尺图2：目镜测微尺和镜台测微尺的校准2、球菌用直径表示大

5、小；杆菌用宽和长来表示。二、血球计数板测定微生物数量镜检计数法适用于各种含单细胞菌体的纯培养悬浮液，如有杂菌或杂质常不易分辨。菌体较大的酵母菌或霉菌泡子可采用血球计数板；一般细菌则采用彼得罗夫·霍泽(PetroffHausser)细菌计数板。两种计数板的原理和部件相同，只是细菌计数板较薄，可以使用油镜观察。而血球计数板较厚，不能使用油镜，故细菌不易看清。血球计数板是一块特制的厚载玻片，载玻片上有4条槽而构成3个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各有一个方格网(图3)。每

6、个方格网共分9大格，其中间的一大格(又称为计数室)常被用作微生物的计数。计数室的刻度有两种：一种是大方格分为16个中方格，而每个中方格又分成25个小方格；另一种是一个大方格分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格。但是不管计数室是哪一种构造，它们都有一个共同特点，即每个大方格都由400个小方格组成(图4)。每个大方格边长为1mm，则每一大方格的面积为1mm2，每个小方格的面积为1／400mm2，盖上盖玻片后，盖玻片与计数室底部之间的高度为0.1mm，所以每个计数室(大方格)的体积为0.1mm

7、3，每个小方格的体积为l／4000mm3第8页共8页微生物实验报告山东大学实验报告2014年11月30日姓名班级13级生命基地班学号同组者：科目微生物学实验题目微生物大小及数量的测定组别3。计数时，通常数五个中方格的总菌数，然后求得每个中方格的平均值，再乘上25或16，就得出一个大方格中的总菌数，然后再换算成1ml菌液中的总菌数。 以25个中方格的计数板为例，设5个中方格中的总菌数为A，菌液稀释倍数为B，则：1mL菌液中的总菌数=A/5×25×104×B=50000A·B（个）同理，如果是16个中方

8、格的计数板，1mL菌液中的总菌数=A/5×16×104×B=32000A·B（个）         图3血球计数扳的构造a.平面图(中间平台分为两半，各半边有一个方格网)b.侧面图(中间平台与盖玻片之间有高度为0.1毫米的间隙)c.图4血球计数板计数网的分区和分格【实验内容及步骤】第8页共8页微生物实验报告山东大学实验报告2014年11月30日姓名班级13级生命基地班学号同组者：科目微生物学实验题目微生物大小及数量的测定组别31、目镜测微尺的校正 把目镜的上透镜旋下（