微生物大小与数量测定.ppt

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1、微生物数量的测定一、目的要求1．明确血细胞计数板计数的原理2．掌握使用血细胞计数板进行微生物计数的方法。二、基本原理微生物个体生长的时间较短，很快进入分裂繁殖阶段，个体生长难以测定。它们的生长一般以繁殖即群体生长作为微生物生长的指标。群体生长表现为细胞数目的增加或细胞物质的增加。测定数目的方法有显微镜直接计数法、平板计数法、光电比浊法等。显微镜直接计数法是将小量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻片上，于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法。三、实验材料酵母菌液显微镜、血球计数器3.盖玻片、毛细管等血球计数板是一块特制的载玻片，有四条竖槽和一条横槽

2、。横槽两边的平台上各有一个有九个大方格的方格网，中间大方格为计数室：边长为１mm，深为0.1mm，容积为0.1mm3(10-4ml)。计数室有两种规格：一是分为16个中方格，每中方格中有25个小方格；另一种是分为25个中方格，每中方格有16个小方格。两种都共有400个小方格。4-24-216小格×25大格计数室25小格×16大格计数室计数室的两种刻度形式四、实验内容一.酵母菌数量的检测（显微镜直接计数法）注意事项:取样时先要摇匀菌液;加样时计数室不可有气泡产生。B.调节显微镜光线的强弱适当。1.取清洁无油的血球计数板，在计数室上面加盖玻片。2.取酵母菌液，摇匀，用滴管由盖玻

3、片边缘滴一小滴，使菌液自行渗入，计数室内不得有气泡。3.静止5min后，用低倍镜观察并将计数室移至视野中央。4.在高倍镜下计数：随机计数五个中格的平均值，然后求得每个中格的平均值。乘上16（或25）就得出一大格中的总菌数，最后再换算到每mL菌液中的含菌数。四、实验内容5.计算方法：6.注意事项：压在方格线上的菌体，以压在底线和右侧线上的菌体计入本格内；遇到有芽体的酵母时，若芽体和母体同等大，就按单个酵母计数。7.计数完毕后，血球计数板要立即清洗干净，并用吸水纸吸干，最后用擦镜纸擦干净，并放回盒内。（X1+X2+X3+X4+X5）5X25（或16）X10X1000x稀释倍数酵

4、母菌细胞数/mL=四、实验内容五、实验报告1、结果记录：将计数结果记录下表。A表示五个中方格中的总菌数。B稀释倍数为102。注:1mL菌液总数=A/5×25×104×B=5×107×A细菌大小的测定一、目的要求学习测微尺的使用和计算方法利用测微尺测量微生物的大小二、基本原理微生物个体生长的时间较短，很快进入分裂繁殖阶段，个体生长难以测定。它们的生长一般以繁殖即群体生长作为微生物生长的指标。群体生长表现为细胞数目的增加或细胞物质的增加。测定数目的方法有显微镜直接计数法、平板计数法、光电比浊法等。微生物细胞的大小是微生物基本的形态特征，也是分类鉴定的依据之一。微生物大小的测定，

5、需要在显微镜下，借助于特殊的测量工具即测微尺，包括目镜测微尺和镜台测微尺。三、实验材料酵母菌液显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺3.载玻片、盖玻片、接种环、胶头吸管等四、实验内容注意事项：观察时光线不宜过强,否则难以找到镜台测微尺的刻度;换高倍镜和油镜校正时,务必十分小心,防止接物镜压坏镜台测微尺和损坏镜头。1.测微尺的校正（标定）：两重合线间镜台测微尺格数Ⅹ10目镜测微尺每格长度(μm)=两重合线间目镜测微尺格数2．酵母菌大小的测定：利用制好的血球器浸片，用高倍镜测出宽和长各占目镜测微尺的格数，再将测到的格数乘以目镜测微尺（用高倍镜时标定的）每格所代表的长度，即为酵母菌的实际

6、大小。五、实验报告（1）将目镜测微尺校正结果填入下表:接目镜放大倍数：-10×-五、实验报告(2)将酵母菌大小测定结果填入下表：五、实验报告2.思考题：在不改变目镜和目镜测微尺，而改用不同放大倍数的物镜来测定同一细菌的大小时，其测定结果是否相同？为什么？为什么更换不同放大倍率目镜和物镜时，必须用镜台测微尺重新对目镜测微尺进行校正？